文档介绍：BD FACSCalibur流式细胞仪
FACS101 Handbook
本课程介绍「表面抗原流式分析」有关之基础工作原理。
一、BD FACSCalibur基本结构
:
1. 电源开关:在BD FACSCalibur仪器右侧下方,先启动仪器本体,再打开计算机。
2. 光学系统:BD FACSCalibur 基本配有一支波长488 nm 的氩离子雷射
以BD FACSCalibur 基本型为例
FSC Diode 只收488 nm波长散射光
SSC PMT 只收488 nm波长散射光
FL1 PMT 荧光光谱峰值落在绿色范围(波长515-545 nm)
FL2 PMT 荧光光谱峰值落在橙红色范围(波长564-606 nm)
FL3 PMT 荧光光谱峰值落在深红色范围(波长>650 nm)
3. 仪器面板:
仪器前方面板的右下方有三个流速控制键、及三个功能控制键。
流速控制:
LO: 样品流速:12 ml /min
MED:样品流速:35 ml /min
HI: 样品流速:60 ml /min
功能控制:
RUN:此时上样管加压,使细胞悬液从进样针进入流动室。(正常显示绿色;黄色时表示仪器不正常,请检查是否失压。)
STANDBY: 无样品或暖机时之正常位置,此时鞘液停止流动,雷射功率自动降低。
PRIME:去除流动室中的气泡,流动室施以反向压力,将液流从流动室冲入样品管,持续一定时间后,以鞘液回注满流动室。PRIME 结束,仪器恢复STANDBY状态。
4. 储液箱抽屉:
在主机左下方之储液箱抽屉。可向前拉开,内含鞘流液筒、废液筒、鞘液过滤器Sheath Filter,及空气滤网 Air filter。请注意气路减压阀VENT TOGGLE之位置。
鞘液筒:位于抽屉左侧,容积4升。装八分满鞘液筒,仪器可以运行大约 3小时。筒上装有液面感应器,鞘液用完时,仪器软件上会有显示。鞘液筒盖上有金属环扣,保证鞘液筒密闭。
废液筒:位于抽屉右侧,容积4升。筒上装有液面感应器,废液盛满时,仪器软件上会有显示。注意废液可能有潜在的生物传染性。
鞘液过滤器:,去除鞘液中的杂质,保证进入流动室的鞘液是干净的。
气路减压阀:沿箭头方向移动阀门开关,鞘液筒减压,气压恢复正常。在鞘液筒添加鞘液时,需要减压。
空气过滤网:用于过滤冷却雷射的空气。
5. 上样品区:
上样品区是样本管的上样位置。它包括三个部分,一个是进样针 Sample Injection Tube,将样本输入流动室,还有就是支撑架 Tube Support Arm、和液滴存留系统 Droplet Containment System。
进样针:是一根不锈钢管,将细胞从样本针中吸入流动室。进样管外有一套管,是液滴保留系统的一部分。
支撑架:用于支撑样本管、并负责启动液滴存留系统。支撑架有三个位置:位于样本管之下的中位,样本管左侧或右侧。
液滴存留系统:系统由支撑架、真空帮浦和外套管组成。当支撑架位于左侧或右侧位置时,真空帮浦就会启动,将液体从外管吸入废液筒内。上样时,须注意将支撑架位于中位,以避免过多样品被抽吸到废液筒内(当支撑架位于中位,真空帮浦停止工作)。更换样品时,让仪器保持RUN的模式,使得进样针可以反冲;切换到STANDBY模式前,确保液路已冲洗彻底以免碎片沈积到流动室中。
Macintosh计算机与打印机:
准备您的细胞样品
理想样品浓度调至1-10 X 105 cells/ml? ml的样品。
细胞样品务必放至BD FALCON 352052 试管中,否则无法上机。
上机前务必去除样品中之细胞团块,以防止管路堵塞?可使用附滤网BD FALCON试管(Cat. ) 或35-55 mm的尼龙筛网。
供流式分析的样品是单细胞悬浮液,而且大部分样品都需经荧光染色。表面抗原荧光染色的方法大致有两种:直接免疫荧光、间接免疫荧光染色。研究生可至本公司网站下载染色方法/bdb/10-5-4-
直接免疫荧光染色
Lysed - No - Wash Procedure
Lysed - And - Wash Procedure, SimulTEST & HLA-B27
Peripheral Blood Mononuclear Cell Procedure
Leukemia and Lymphoma Procedure 1
Leukemia and Lymphoma Procedure 2, B-cell Clonality Assay
间接免疫荧光染色
滴定抗体浓度
常用试剂
如因特殊因素无法下载上述实验方法,