文档介绍：CL-BIII 四通道残留农药测定仪使用说明 CL-BIII 四通道残留农药测定仪使用说明上海博纳新技术研究所 2006 年2月上海博纳新技术研究所 2006 年2月农残常识 1 农残常识 1 有机磷和氨基甲酸酯类杀虫、杀螨剂的特点。两类农药的作用机理均为抑制动物体内乙酰胆碱酯酶的活性,破坏神经传导,引起一系列的神经中毒症状,直至死亡。二者的主要区别在于:有机磷类杀虫、杀螨剂对乙酰胆碱酯酶的抑制是不可逆的,而氨基甲酸酯类杀虫、杀螨剂对乙酰胆碱酯酶的抑制是可逆的。农残常识 2 农残常识 2 酶抑制率法和酶系酶源:国家标准 GB/T - 2003 《蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测》推荐的酶抑制率法能方便、快速、准确、成本低廉检测出农产品中的农药残留,也同时肯定了乙酰胆碱酯酶酶系作为快速检测推荐试剂的活性量和具体要求。近年来, 我们通过对动物源和植物源的多种丁酰胆碱酯酶、乙酰胆碱酯酶进行检测实验和比较研究,发现乙酰胆碱酯酶对农药的检测敏感度和综合指标优于丁酰胆碱酯酶;确定了有机磷和氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酸有较专一性的抑制作用;分析出在抑制率 70% 以下,大多数农药浓度和乙酰胆碱酯酶抑制率呈较好的线性关系,并能实现对单种农药的定量分析;解决了酶的活性和稳定性控制等技术农残常识 3 农残常识 3 什么是间接比色法: 由于只有当底物与产物之间,在光学性质或其它理化性质有显著差异时,才可能直接用分光光度计法测定,因此对酶活性浓度的监测大多是采用间接监测法。如对胆碱酯酶的测定:底物(硫代乙酰胆碱)及酶水解产物(硫代胆碱和乙酸)并不具有颜色,不能用分光光度计法测定。所以必须设法在原来反应体系中添加一些试剂,这些试剂必须不与酶作用也不影响酶活性,同时又能与酶反应物迅速作用,产生可以被直接测定的物质。这就产生了 Ellman 的胆碱酯酶测定法即间接连续监测法。目前国内大多厂家生产的快速农药测定仪都采用了 Ellman 的胆碱酯酶测定法即间接比色法。该方法通过监测底物(硫代乙酰胆碱),酶水解产物硫代胆碱与添加的二硫代硝基苯甲酸( DTNB ) 作用立刻生成黄色化合物的反应速度来测定酶活性变化。农残常识 4 农残常识 4 什么是固定时间法: 早期这类方法常被命名为“终点法”、“二点法”、“固定时间法”和“取样法”。该方法先选择一段固定的时间(固定为 3 分钟),先让酶与底物在一定温度下进行一段固定的时间(固定为 3 分钟)的化学反应,并根据呈色测出底物和产物的变化用比色法对反应结果进行评定。由于“二点法”容易受到干扰,并产生误差, 使检测稳定性较低。农残常识 5 农残常识 5 什么是连续监测法: 50年代, Warburg 首先用分光光度计测定酶的活性。该方法不需停止酶反应就可测定反应物的变化,容易观察到反应的整个过程和干扰情况(通过绘制反应曲线)。因此逐步取代了固定时间法成为目前测酶活性的主要方法。该方法是利用连续对反应过程进行高灵敏度检测,并通过绘制整个酶反应曲线避开延滞期和非线性反应期,只在线性反应期测定最大反应初速度。由于仪器的高精密度,连续监测法能在很短时间,甚至在 1分钟反应时间内就能准确测定出活性的抑制率。技术指标技术指标 CL-BIII 四通道残留农药测定仪的技术指标: ?测量波长: 410 nm ?通道数: 4?检测用样品器皿: 10 mm 比色皿?光电流漂移: <1% (3 min) ? 暗电流漂移: <1% (3 min) ?抑制率显示范围: 0-100% ? 抑制率测量范围: 10-100% ? 农药检测:(用甲胺磷农药标样测试) ?抑制率示值误差: ± 10 % ?抑制率重复性误差: 5 % 第一部分试剂配制第二部分联机使用第三部分单机使用第四部分相关技巧与常识目录目录第一部分试剂配制第一部分试剂配制 1、试剂的配制 1、试剂的配制提取液:把提取液甲乙粉末倒入大玻璃瓶中,并加 510 ml蒸馏水溶解。酶试剂:用移液枪取 ml提取液,加入酶试剂瓶中。显色剂:用移液枪取 20ml提取液,加入显色剂瓶,溶解后倒入棕色瓶中。底物:用移液枪取 ml蒸馏水,加入底物瓶中。