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叶绿素实验.doc

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【精品文档】第 1 页
叶绿素的提取及稳定性实验
一、实验目的
  1. 掌握测定叶绿素含量的原理和方法。
  2. 通过测定光、加热等对叶绿素稳定性的影响,了解果蔬加工中的护绿措施。
二、实验原理
  叶绿素广泛存在于果蔬等绿色植物组织中,并在植物细胞中与蛋白质结合成叶绿体。当植物细胞死亡后,叶绿素即游离出来,游离叶绿素很不稳定,对光、热较敏感;在酸性条件下叶绿素生成绿褐色的脱镁叶绿素,在稀碱液中可水解成鲜绿色的叶绿酸盐以及叶绿醇和甲醇。高等植物中叶绿素有两种:叶绿素a 和b,两者均易溶于乙醇、***、***和***仿。
叶绿素的含量测定方法有多种,其中主要有:
  :通过测定镁元素的含量,进而间接计算叶绿素的含量。
  :利用分光光度计测定叶绿素提取液在最大吸收波长下的吸光值,即可用朗伯—比尔定律计算出提取液中各色素的含量。
  叶绿素a 和叶绿素b 在645nm 和663nm 处有最大吸收,且两吸收曲线
相交于652nm 处。因此测定提取液在652nm 波长下的吸光值,并根据经验公式可计算出叶绿素含量。
三、仪器、原料和试剂
 仪器:S54紫外可见分光光度计、恒温水浴锅、天平、研钵、小漏斗、滤纸、烧杯、容量瓶、试管、量筒、刻度管。
  原料:菠菜
  试剂:1. ***;2. 石英砂;3. 碳酸钙粉;4. 硫酸铜晶体;5.
6.
四、操作步骤
  ,称取菜叶5g,放入研钵中,加少量石英砂(~1g)和25
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ml冷***,研成均浆,倒入100ml容量瓶中,再用***定容至100 ml。充分振摇后用滤纸过滤。即为叶绿素提取液。取提取液在652nm处测其吸光度。以95%***为空白调零。
  2.光对叶绿素稳定性的影响
取两支试管,编为1号管和2号管,分别取5ml叶绿素提取液中注入1号管和2号管,一支置暗处,一支置强光下,2h后,分别在分光光度计652nm处测定其吸光值。

取5支试管,编号为1、2、3、4、5号,分别取5ml叶绿素提取液注入其中,再分别于40℃、50℃、60℃、70℃、80℃的水浴中加热10min,加热后,待冷至室温后在625nm处测定其吸光值。

分别取叶绿素提取液5ml与两支试管中,,,观察