文档介绍：关于分子克隆常用工具酶
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每一单链具有 5’-3’极性
两条单链间以氢键连接
两条单链，极性相反，反向平行
以中心为轴，向右盘旋
Structure and features
DNA 的基本结构
植物基因工程
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第三页，本课件共有72页
Replication
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分子克隆操作过程：

克隆目的基因→将目的基因与载体用限制性内切酶切割和连接，制成重组DNA→导入宿主细胞→筛选、鉴定→扩增和表达。
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工具酶是指能用于DNA和RNA分子的切割、连接、聚合、反转录等有关的各种酶系统称为工具酶。
要把不同基因的DNA线形分子片段准确地切出来，需要各种限制性核酸内切酶（restriction endonuclease）；要把不同片段连接起来，需要DNA连接酶（ligase）；要合成基因或其中的一个片段，需要 DNA 聚合酶（polymerase）等。
因此，酶是 DNA 重组技术中必不可少的工具。
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核酸水解酶类
核酸合成酶类
核酸修饰酶类
核酸内切酶核酸外切酶
DNA聚合酶RNA聚合酶DNA连接酶
磷酸酶
核苷酸激酶
核苷酸转移酶
***化酶
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限制性核酸内切酶
DNA连接酶
DNA聚合酶
核酸酶
核酸修饰酶
用于核酸操作的常用工具酶
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工具酶名称
主要功能
限制性内切核酸酶
Restriction endonucleases
在DNA分子内部的特异性的碱基序列内部进行切割
DNA连接酶
DNA ligase
将两条以上的线性DNA分子或片段催化形成磷酸二酯键连接成一个整体
DNA聚合酶I
DNA polymerase I
通过向 3‘ 端逐一增加核苷酸以填补双链DNA分子上的单链裂口，即5’→3‘ DNA 聚合酶活性与 3'→5'及5'→3'-外切酶活性
多核苷酸激酶
DNA polymerase kinease
催化将把一个磷酸分子加到多核苷酸链的5'-OH末端上
反转录酶
Reverse transcriptase
以RNA分子为模板合成互补的cDNA链
DNA末端转移酶
DNA terminal transferase
将同聚物尾巴加到线性双链或单链DNA分子的3'-OH末端或DNA的3'-末端标记dNTP
降解酶 S1
nuclease S1
降解单链DNA或RNA，产生带5'磷酸的单核苷酸或寡聚核苷酸，同时也可切割双链核酸分子的单链
Taq DNA 聚合酶
Taq DNA polymerase
能在高温（72℃）下的单链DNA为模板，从5'→3'方向合成新生的互补链
常用的工具酶性质及功能
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第一节分子克隆最常用两个工具酶
“分子
剪刀”
⒈ 限制性核酸内切酶 —— 在DNA上核苷酸的特定连接处以特定的方式把DNA双链切开。如EcoRI, HpaI
“分子胶”
⒉ DNA连接酶——促使具有互补粘性末端或平头末端的载体和供体DN***段连接，形成重组DNA分子。
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