文档介绍：圣国家高等职业教育畜牧兽医专业教学资源库
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实训11精子形态和畸形率的测定教案
一、目的和要求
. 了解家畜精液中精子形态与精液品质的关系。
.掌握精子染色和畸形率检查的方法与注意事项。
二、材料与器械
.配有低倍镜及高倍镜的生物显微镜、相差显微镜、计数器。
.载玻片、盖玻片、擦镜纸、纱布、小试管、玻璃棒、烧杯、电源插板。
.家畜新鲜（或解冻）精液、生理盐水、美兰染液、蒸储水、 96%酒精。
三、内容步骤
（一）介绍畸形率的定义和表示方法
精液中形态不正常的精子称为畸形精子，精子畸形率是指精液中畸形精子数
占总精子数的百分比。畸形率对受精率有着重要影响，牛、猪不超过 18%,羊
不超过14%,马不超过12%。受精力一般不受影响，如果在检查精子运动力时， 可观察到许多畸形精子，则需要进一步作畸形率测定。否则，视为精液品质不良， 不能用于输精。
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畸形精子各种各样，大体可分为以下 3类 头部畸形：顶体异常、头部瘦小、细长、缺损、双头等 颈部畸形：膨大、纤细、带有原生滴、双劲等。
尾部畸形：纤细、弯曲、屈折、带有原生滴等。如图 -所示。
(二)畸形率的检查方法
精子的畸形率通常采用显微镜染色检查。
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.染液制备
精液染色可选用的染液有复红染液、美兰染液、苏木精 -伊红染液、龙胆紫、 纯红或纯兰墨水等。
(1)复红染液：复红原液(10 g复红溶于100 ml 96 %的酒精)10 ml力口 5 % 石碳酸(苯酚)100 ml。取上述混合液50 ml加饱和伊红酒精溶液25 ml放置两 周后即可使用。
(2)美兰染液：美兰溶液(10 g甲基兰溶于1000 ml 96 %的酒精中)30 ml加 % KOH 100 ml过滤后再加入3倍量的蒸储水，混合后即可使用。
(3)龙胆紫染液：，加水至100毫升，过滤至试 剂瓶中备用。
.染色程序
(1)制片 用玻璃棒或吸管取一滴蒸储水于载玻片上，用盖玻片呈 30。〜45角
将水滴压个四方形，然后用吸管吸取一小滴精液滴于四方形之上，反复倾斜载玻 片，使精液均匀分布在“四方形”上，这样操作不会因制片而人为导致精子畸形。 取精液时，精液滴既不可过大，又不可过小。过大会导致干燥时间过长，精液过 厚，不利于找到较好的检查视野；过小则不能正常涂片或使涂片面过小。
(2)干燥 一般正常情况下，在室温状态下放置 3〜4min,抹片即可自然干燥。 如室温较低，可将抹片置于30c左右的地方，使涂片正常干燥。
(3)固定 用96%酒精滴于涂片上2〜3min,使精子贴于载玻片上。
(4)染色 用吸管取一滴美蓝染液滴于涂片上，并反复倾斜载玻片使染液覆盖涂 抹有精液的地方，一般染色2〜3min即可。
(5)水洗将蒸储水形成细线来冲洗掉涂片上多余的染料，以利进行观察。水流 不可过大，否则易将精子洗掉。玻片冲洗至半透明状，能肉眼透视到玻片上的稀
薄染料时较合适。