蛋白质高效液相色谱技术.ppt

文档介绍：高效液相色谱技术特点概述
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HPLC系统各组分介绍；
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流动相的要求及准备过程
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4
HPLC色谱技术与其他技术联用
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HPLC 应用举例
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现状与展望
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第一页，共30页。
应用
范围广
高灵
敏度
高效
高压
分析速
度快
HPLC是近二十年来发展起来的一项新颖快速的分离技术。它是在经典液相层析法基础上，引进了气相层析的理论具有气相层析的全部优点。
特 点
第二页，共30页。
根据分离机理蛋白质HPLC又可分为
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2
4
3
高效凝胶过滤色谱(HPSEC)
高效离子交换色谱（HPIEC）
高效亲和色谱（HPAFC）
反向高效液相色谱（RP-HPLC）
第三页，共30页。
高效液相色谱仪
第四页，共30页。
常用的HPLC仪
Waters公司
Agilent公司
岛津公司等
第五页，共30页。
一 进样系统
进样方式
隔膜进样
*阀进样
自动进样
停流进样
第六页，共30页。
六通阀进样
高效液相色谱系统中最理想的进样器，它是由圆形密封垫(转子)和固定底座(定子)组成。美国Rheodyne公司的六通阀进样器最为通用，各大HPLC仪器制造商均以此产品作为仪器的进样器。
上样
分析
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进样方式
部分装液法
进样量应不大于定量环体积的50%（最多75％），并要求每次进样体积准确、相同 。
缺点是易产生由进样引起的峰展宽
完全装液法
进样量应不小于定量环体积的5~10倍（最少3倍），这样才能完全置换定量环内的流动相，消除管壁效应，确保进样的准确度及重复性
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二 输液系统
在线脱
气装置
梯度仪
高压输
液泵
输液系统
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高压输液泵
输液泵是HPLC系统中最重要的部件之一。其作用是将流动相以稳定的流速或压力输入到色谱系统。泵的性能好坏直接影响到整个系统的质量和分析结果的可靠性 。
流量稳定
流量范围宽
输出压力高
液缸容积小
密封性能好，耐腐蚀
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