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展示生长抑素的猪细小病毒样颗粒构建及其免疫效力研究.pdf

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文档介绍

文档介绍:原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者(需亲笔)签名: 讯噎亿2叩年J1月扣日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密口,在——年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。(请在以上方框内打“√”) 学位论文作者(需亲笔)签名: 撤鱼杠导师(需亲笔)签名: 硼年J|月扣日。号年,J月;夕日第二章生长抑素研究进展 lSS结构 2SS作用机制 3SS影响动物生长的生理功能 4动物生长抑素的调控研究 5生长抑素的应用?????????一参考文献?. 第三章杆状病毒/昆虫细胞表达系统研究进展 1杆状病毒的基本特性 2杆状病毒的基因组结构???. 19 20 20 21 23 ???????.???????????27 27 3杆状病毒的感染周期及形态结构???????????????????~28 29 31 6影响杆状病毒系统表达外源基因产物的因素???一??????????一33 7杆状病毒/昆虫细胞表达系统的应用与前景???????????????-33 参考文献 36 n 中文摘要展示生长抑素的猪细小病毒样颗粒的构建及其免疫效力研究中文摘要猪细小病毒(Procineparvovirus,PPV)是引起母猪繁殖障碍的主要病原体之一, ,约占衣壳蛋白总量的 80%,, (somatostatin,ss)是下丘脑释放的14肽激素,,通过中和SS 进而提高生长激素水平促进动物生长. 本文以猪细小病毒vP2蛋白为载体,在其N端插入4拷贝生长抑素,用杆状病毒表达系统获得自我装配的病毒样颗粒,: 1重组生长抑素的猪细小病毒VP2基因在昆虫细胞中的表达及鉴定以PPV ,人工合成4拷贝生长抑素基因,,.Ⅵ’,-9细胞,出现病变后收毒鉴定,-blot可见约68kDa的rSS4一VP2 条带;rBae-;感染细胞超薄切片电镜观察到大量特征性病毒样颗粒. 2杆状病毒表达SS4-VP2重组蛋白纯化免疫原性初步鉴定 4周龄清洁级小鼠80只随机分为9组:SS4-VP2/白油、SS4-VP2/铝胶, .VP2/铝胶+CpG、+CpG,-VP2/铝胶+CpG、、/ 只,杆状病毒及猪细小病毒灭活疫苗免疫剂量为5×105TCID,。/只,共免疫3次,免疫间隔2周。ELISA试剂盒检测猪细小病毒抗体结果表明,重组蛋白组与PPV NJ—a灭活苗组均产生特异性抗体,,,阴性对照组没检测到特异性抗体;利用PK-15细胞检测PPV特异性中和抗体水平,中展示生长抑素的猪细小病毒样颗粒构建及其免疫效力研究和抗体的滴度与ELISA检测效价正相关,SS4-VP2/铝胶组中和抗体效价最高;重组蛋白免疫组均产生较高滴度的抗生长抑素抗体,同时,生长激素水平提高了1倍左右. ,通过PEG-NaCl方法浓缩、纯化 PPV,,不完全弗氏佐剂乳化,3次免疫家兔,每次免疫间隔两周,制备得到兔抗PPV特异性多克隆抗体. Western-blotting,间接免疫荧光均证明该多克隆抗体能与杆状病毒表

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