文档介绍：枸杞多糖的提取与鉴定 1242818 杨立君实验原理强酸可以使糖类脱水生成糠醛。生成的糠醛或羟甲基糠醛与蒽酮脱水缩合, 形成糠醛的衍生物,呈蓝绿色。颜色的深浅可以作为定量的标准。这一方法具有很高的灵敏度,糖含量在 30μg左右就能进行测定,所以可以作为微量测糖之用。一般样品少的情况下,采用这一方法比较合适。实验试剂 :将葡萄糖 105 ℃烘干至恒重( 2h),准确称取 50mg, 无离子水定容至 500mL, 终浓度为 . -浓硫酸试剂:称取 蒽酮,溶于 100mL 浓硫酸,现用现配。 ,阿拉伯糖,甘露糖]3[ ],2[4. 硫代硫酸钠溶液, 活性炭, 正丁醇,无水乙醇,丙酮。三氯甲烷, 甲苯胺乙醇溶液实验器材分光光度计,超速离心机,电炉,烧杯,试管,干燥器,滤纸,层析缸以及其他相关玻璃仪器实验流程(一)提取枸杞干果粉碎,氯仿-甲醇( 2∶1)回流脱脂 8~10 h近无色,挥干溶剂以后将脱脂后的枸杞样品放入烧杯中,分3次加 15、12、10倍量的蒸馏水于 90℃水浴提取,每次 2h;收集 3次的滤液减压浓缩至约 200 mL ,转移到大烧杯中, 加4倍量的 95% 乙醇,沉淀 12h后抽滤,并依次用无水乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤,干燥后便得到枸杞多糖的粗制品。]4[ (二)纯化多糖粗品加水溶解, 4000 r/min 离心 10 min 后取上清液,加 30% 双氧水适量, 40℃保温 4~6h后,加三氯甲烷-正丁醇( 4∶1, Sevag 法)溶液沉淀蛋白,取上清液;此步骤反复多次,直到无白色絮状沉淀出现。将除去蛋白的多糖溶液浓缩后,转移到分子排阻为 8000 ~10000 Da 的透析袋中,流水透析 24h 后,蒸馏水透析过夜,溶液颜色变淡,浓缩后真空干燥得枸杞多糖精制品。]4[(三)理化性质分析将枸杞多糖精品分别加入水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和正丁醇中,观察其溶解性。另在浓硫酸存在下观察枸杞多糖与α-萘酚的作用,于界面处观察颜色变化。(四) 蒽酮比色法测定含量 :取六只试管,如下表进行操作: 1ml 多糖溶液置试管中,浸于冰浴中冷却,再加入 4ml 蒽酮试剂,沸水浴中煮沸 10min ,取出后自来水冷却, 620nm 比色,其他条件与做标准曲线相同。测得吸光度值由标准曲线查处出样品液的糖含量。(如果样品管的吸光度值超出标准曲线范围,需将样品进行适当的稀释,再取 1mL 进行鉴定)。 3,计算根据所测的吸光度平均值,根据标准曲线,求得糖含量(微克),记为枸杞多糖 CmVCg????) ( ) 枸杞多糖含量( 枸杞多糖枸杞多糖 n/g?式中枸杞多糖 C 表示 1mL 样品测定液的多糖含量(μ g) ; 枸杞多糖 V 表示多糖提取液的体积( mL ) ;n表示测定液的稀释倍数; m表示枸杞的质量。(五)枸杞多糖及单糖鉴定纸层析 -浓氨水-水为展开剂,分别将枸杞多糖粗品和精品溶于水中,点样于层析滤纸上,展层后吹干,以甲苯胺乙醇溶液染色,乙醇漂洗。 ,将多糖样品水解液点样,近旁点已知组分的标准混合液。滤纸条悬挂于层析缸中层析,纸条在显色剂中浸泡一下,悬于空气中, 用 NaOH- 乙醇液喷雾于滤纸上至完全润浸并显出色斑,干