文档介绍：一 实验目的
1、掌握细菌总数的测定方法
2、掌握大肠杆菌的鉴定和计数方法
3、巩固无菌操作技术
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用营养琼脂倾注平板，测定被检物在单位重量或体积（g或ml）内所含有的活细菌数量，以判明被检物被细菌污染的程度。
二 实验原理
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2 大肠杆菌鉴定原理
大肠菌群：一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否染肠道致病菌的可能。
样品中大肠菌群系以100mL（g）检样内大肠菌群最大可能数（MPN)表示。
第三页，共23页。
细 菌 学 检 验 程 序
样品
细菌总数 大肠菌群
水样稀释或不稀释
水样稀释或不稀释
第一步------ 初步发酵试验
倾注平板培养 （乳糖发酵）
37 ℃ 24小时 37℃ 24小时
菌落计数 第二步------ 平板分离培养
（取平均数报告） （转种鉴别培养基）
37℃ 24小时
革兰染色镜检
第三步------- 乳糖复发酵试验
报告结果
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三、实验器材
1、恒温培养箱（36℃±1℃ ）、恒温水浴锅（46℃±1℃ ） 、天平、灭菌培养皿、试管。
2、培养基及试剂：
乳糖胆盐发酵管、伊红美蓝琼脂平板（EMB）、牛肉膏蛋白胨培养基
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无菌生理盐水， 使样品（自来水、饮用水、饮料等）成 1：10 、1：100 、1：1000 等几个稀释度；样品（下水道水、牛奶）稀释度要适当高。
：100、1：10、原样的样品各1ml，每个稀释度均做一个平板。
注意 ：先加浓度低的样品，再加浓度高的样品
℃的营养琼脂倾注于平皿中，摇匀，置37 ℃培养24小时。
四、实验步骤-细菌总数测定
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平皿分4部分点数（见图）
求同一稀释度的平均菌落数
如： A1数 + A2数 + A3
3
4、菌落计数：
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1）平板菌落数的选择
2）稀释度的选择
3）菌落数的报告
菌落数＜100 按实有数报告
菌落数＞100 采用两位有效数，后面数值 四舍五入（也可用10的指