血清丙氨酸氨基转移酶测定资料讲解.ppt

文档介绍：血清丙氨酸氨基转移酶测定
转移酶（transferases）
催化特定的基团从一种底物转移到另一种底物的酶。
反应代表式为：
AB+C A+BC
B为被转移的基团，如氨基（—NH2）等
转氨酶（transaminase）
又称氨基转移酶。
大多数转氨酶是催化α-氨基酸的氨基转移到α-酮酸的酮基上，产生另一种α-酮酸和α-氨基酸。
酶联-紫外连续监测法
原理：
L-丙氨酸+α-酮戊二酸 丙酮酸+L-谷氨酸
丙酮酸+NADH L-乳酸+NAD+
在340nm连续监测NADH的消耗量，从而计算出ALT的活力。
ALT
LD
方法学评价：
血清中也含有酮酸及LDH，可以消耗NADH而使测定结果偏高。
对策：采用过量的NADH（~），将血清同不含α-酮戊二酸的所有试剂一起预温，使其他副反应充分进行，再加入α-酮戊二酸以启动酶反应，监测光吸收的变化，可完全排除这种干扰。
定时比色法
国内采用的比色测定法有三种：
赖氏法（30min）
金氏法（60min）
改良穆氏法（30min）
三种方法的原理、试剂、操作步骤和酶作用温度
都相似，单位定义和标准曲线绘制方法有差异。
国内较多采用赖氏法，其优点为：
标准曲线中两种酮酸的量客观地反映了酶作用的实际情况；
标准曲线上单位的数字准确地反映出酶活力的大小；
测定结果可以直接与分光光度法相比较。
赖氏法原理：
丙酮酸和α-酮戊二酸在血清ALT的作用下生成丙酮酸和谷氨酸，在酶反应到达规定时间内，加入溶于酸的2，4-二硝基苯肼终止酶反应，并分别与产物丙酮酸和剩余底物α-酮戊二酸生成相应的二硝基苯腙，在碱性条件下均呈红棕色，二者吸收光谱在505nm处差异最大，丙酮酸苯腙的呈色强度约为α-酮戊二酸苯腙的3倍，据此可算出丙酮酸的生成量，推算出ALT的酶活力。
临床意义
ALT常作为判断肝细胞损伤的灵敏指标。
1、急性病毒性肝炎，可观察病情发展，作预后
判断。
2、慢性病毒性肝炎或脂肪肝，正常或轻度增高。
3、肝硬化、肝癌时，ALT轻度或中度增高，提
示可能并发肝细胞坏死。
4、其它原因引起的肝脏损害、骨骼肌损伤、多
发性肌炎等亦可引起ALT增高。
注意事项
1、严重脂血症或黄疸血清可使测定管吸光度明
显增加，检测此类标本时，应作血清对照管。
2、加入2，4-二硝基苯肼溶液后应充分混匀，使
反应完全，否则影响重复性。
3、呈色物质配制必须准确。
4、应使用外观洁白、干燥的高纯度丙酮酸钠。
5、标本测定值超过150酶活力单位时，应用生理
盐水稀释后再测。