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小鼠精子畸形实验.ppt

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小鼠精子畸形实验.ppt

上传人:977562398 2021/12/31 文件大小:4.11 MB

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小鼠精子畸形实验.ppt

文档介绍

文档介绍:•遗传学终点(genetic endpoint):遗传学实验观察到的现象所反应的各种事件。
•遗传学终点分类:共4类
1)基因突变; 2)染色体畸变;
3)染色体组畸变; 4)DNA损伤
第一页,共18页。
1、基因突变检测
Ames试验、果蝇伴性隐性致死试验、正向基因突变试验
2、染色体损伤检测
染色体畸变分析、微核试验、显性致死试验
3、DNA损伤检测
SCE试验、UDS试验、SCGE试验
第二页,共18页。
目的
观察精子在生成过程中形态的改变来检查受试物对雄性生殖细胞的致突变作用.
第三页,共18页。
原理
精子的成熟和正常形态受多种基因控制,当这些基因中任何一个在化合物的作用下发生突变,就会导致畸形率增高。
某些特殊的染色体重排,如性-常染色体易位是精子产生畸形的主要机理。但是,缺血、变态反应、感染和体温升高也可能导致精子的畸形。
第四页,共18页。
器材与试剂
器材:显微镜;镊子;剪刀;平皿
试剂:生理盐水;无水乙醇;2%伊红水溶液
第五页,共18页。
试验设计
1、试验动物:采用6~8周龄性成熟雄性小鼠
2、接毒剂量及分组:受试物设高、中、低三个剂量组,同时设阴性和阳性对照组。
第六页,共18页。
试验设计
受试物高剂量组的总剂量应能使部分动物死亡,然后以1/5或1/10递减为中、低剂量组。
  阳性对照组用环磷酰***20 mg/kg,腹腔注射,连续5天,每天一次。
第七页,共18页。
操作步骤
处死动物:用颈椎脱法处死小鼠,剪开腹腔,取出两侧附睾
过滤:放入盛有约1ml生理盐水的平皿中,用眼科剪剪碎附睾,四层擦镜纸过滤
涂片:取1小滴滤液涂片
第八页,共18页。
固定:干燥,甲醇固定5分钟(可以直接涂片镜检)
染色:用2%伊红染色1小时,冲洗
镜检:干燥镜检(先用低倍镜,再用高倍镜,在较暗的视野下观察)
操作步骤
第九页,共18页。
首先,在低倍镜下选择背景清晰、精子分布均匀、重叠较少的区域,然后,在高倍镜下观察结构完整的1000个精子,计数其中畸形的精子。
观察与计数
第十页,共18页。