文档介绍：中文摘要补体Clq等具有多种免疫调节功能,;Fraser 等发现MBL能够抑制脂多糖(haride,LPS)。而目前国内外关于MBL对中性粒细胞(polymorphonuclear neutrophils,PMN)功能的影响报道较少,因此有必要深入探讨。本研究中,我们利用人PMN为细胞模型,初步研究了有无MBL缺陷人血清条件下MBL对PMN功能的影响,及在白色念珠菌刺激下对PMN功能的影响。第一章人天然MBL的提取与纯化 MBL是肝细胞分泌的血浆蛋白,是天然免疫系统中一个关键的可溶性模式识别受体。正常人血浆中MBL含量较低,约10-~500099/L,平均约为120099/L。基于本科室的长期工作基础,已经建立了对人天然MBL分离纯化的方法。因有文献报道热原及血浆中IgG有可能干扰实验,因此在本研究中, 4B亲和层析体系,分离得到粗提MBL,经LC柱和多粘菌素B 凝胶柱去除IgG与LPS,最后得到无热源的人天然MBL蛋白。和Westem blot检测纯化MBL的纯度及存在形式;同时应用配体结合实验鉴定 MBL的活性。 blot结果显示纯化得到的MBL主要以高聚体的形式(分子量>200 KD)存在,杂蛋白IgG得到明显的去除;同时鲎试剂检测表明,经过多粘菌素B凝胶柱纯化后的MBL中残余的LPS量符合无热源要求;并通过配体结合实验证实所得的MBL仍保持良好的结合活性,为后续的实验开展提供可靠的保证。第二章存在补体时MBL对人PMN功能的影响 PMN作为天然免疫中重要的吞噬细胞,在抗病原微生物感染中起着重要作硕士学位论文用。其在炎症局部促炎因子和趋化因子的作用下,可快速迁移到炎症部位并通过释放炎性细胞因子、活性氧及脱颗粒等发挥抗感染作用。PMN作为人体数量最多的吞噬细胞,在天然免疫防御中发挥着极其重要的意义;但在免疫调节紊乱的情况下,PMN可能加重炎症反应从而使机体产生严重的损害,因此对PMN 功能调节的研究显得尤为重要。由于MBL也是天然免疫系统重要的效应分子, 因此我们研究MBL对PMN功能的影响。我们采用ELISA和Dot blot法检测 MBL与微生物的结合:【和IL一6的影响; 应用流式细胞术检测及荧光显微镜观察MBL对PMN吞噬功能的影响;qPCR ,;应用NBT法检测MBL 对PMN呼吸爆发的影响。ELISA和Dot bolt结果显示MBL与微生物结合并呈浓度依赖关系;存在MBL缺陷人血清时,MBL促进PMN对白色念珠菌(Candida albicans,)吞噬,且可被Mannan阻断,但对吞噬大肠杆菌(Escherichia coli,)无明显差别:qPCR结果显示:与空白组相比,MBL组PMN表达 ,;同时ELISA结果显MBL组对比空白组 ;NBT结果显示,MBL组呼吸爆发程度高于对照组。以上结果提示MBL能促进炎性细胞因子分泌,增强PMN吞噬功能。第三章无补体存在时MBL对PMN功能的影响 MBL的糖识别域(carbohydrate—recognition domain,CRD)可识别病原微生物表面的糖结构,并通过其CLR与吞噬细胞表面胶凝素受体结合,以不依赖补体系统,而发挥直接调理功能和MBL依赖的细胞介导的细胞毒作用。因此我们研究了无补体存在时MBL对PMN功能的影响。通过ELISA法检测MBL对 ;,【;采用NBT法检测MBL对PMN呼吸爆发的影响;应用hoechst检测MBL对PMN凋亡的影响。ELISA结果显示,C. albicans刺激PMN时,低剂量的MBL()【中文摘要和IL一6,而较高剂量的MBL(20}tg/m1)对比低剂量的MBL(}tg/m1),TNF一0c 的分泌受到显著的抑制,同时抑制作用可被Mannan所阻断; ;LPS刺激PMN时,ELISA和qPCR 【的分泌;Hoechst检测结果显示高浓度 MBL处理后PMN核质染色高亮点明显增多对比空白组;。以上结