文档介绍：原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者: 日期: 年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品,知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时,第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者: 日期: 年月日中文摘要摘要第一部分郑州地区5种食尸性苍蝇mtDNA中C0Ⅱ基因序列的检测目的:法医实践案例中有时需要用食尸性苍蝇及其幼虫、卵来推断死亡时间, 但是用传统的形态学方法不能鉴定大多数食尸性苍蝇的幼虫和全部的卵。本研究取材郑州地区食尸性苍蝇及其幼虫,试用线粒体DNA上CO II基因637bp序列片段来解决种类鉴定问题,为法医实践提供方便,为推断死亡时间提供依据。方法:4月"11月期间将SD大白鼠尸体放置在实验地点,观察尸体上食尸性苍蝇的群落组成与演替,采集野外的食尸性苍蝇的成虫和饲养的幼虫做样本, 用酚.***仿提取法和安瑞生等改进的小型昆虫DNA匀浆法提取样本的基因组 DNA,通过UN II型扩增仪进行PCR扩增,扩增产物经琼脂糖电泳和聚丙烯酰***凝胶电泳检测,并寄往上海生工进行正反双向测序,用DNAMAN 、剪切,得出引物间的COII基因序列,,并分析各种苍蝇COII基因的碱基特征,探索其中的多态性。结果:本实验时间段内,郑州地区主要有3科8种苍蝇出现在尸体上,分别是舍蝇、棕尾别麻蝇、大头金蝇、铜绿蝇、丝光绿蝇、巨尾阿丽蝇、亮绿蝇、开普黑蝇,各种苍蝇在尸体上出现的时间和演替表现出一定规律性。对5种26个苍蝇的COII基因序列分析,得出各种苍蝇的遗传距离,通过对种内和种间进化分歧分析,巨尾阿丽蝇、亮绿蝇和棕尾别麻蝇的种内和种间进化分歧没有重叠现象,通过进化分歧分析能鉴定这3种苍蝇。对26个苍蝇用UPGMA法、NJ 法和ME法构建三种系统进化树,由进化树可以鉴别巨尾阿丽蝇、亮绿蝇和棕尾别麻蝇三种食尸性苍蝇。通过进化分歧分析和系统进化树都不能将丝光绿蝇和铜绿蝇鉴别开。结论:通过对郑州地区5种食尸性苍蝇mtDNA中CO II基因的637bp序列片段进行分析,可以发现不同种类食尸性苍蝇的基因序列碱基差异,计算出不同种类食尸性苍蝇的进化分歧和进化距离,构建系统进化树,能解决部分不易鉴定食尸性苍蝇的卵、幼虫、蛹种类的难题,此方法简便、快捷、准确,可以作为法医鉴定食尸性苍蝇种类的可靠依据,值得广泛推广和应用。中文摘要第二部分SNP在食尸性苍蝇种类鉴定中的应用从Genbank数据库下载常见的棕尾别麻蝇、大头金蝇、巨尾阿丽蝇、亮绿蝇、铜绿蝇和丝光绿蝇6种食尸性苍蝇mtDNA上细胞色素氧化酶辅酶(CO) I和II基因序列,,寻找能鉴定种类的单核苷酸多态性(SNP)位点,结果显示棕尾别麻蝇、大头金蝇、巨尾阿丽蝇、亮绿蝇存在SNP位点。小结:COII基因序列可以有效鉴定巨尾阿丽蝇、亮绿蝇和棕尾别麻蝇,不能鉴定丝光绿蝇和铜绿蝇;棕尾别麻蝇、大头金蝇、巨尾阿丽蝇、亮绿蝇存在 SNP位点。关键词:郑州地区,线粒体DNA,食尸性苍蝇,CO I,COII,单核苷酸多态性,种类鉴定 Abstract Abstract Sequencing ofmitochondrial DNA CO IIgene incarrion—breeding fliesinZhengzhou Objective:Carrion-breeding flies andtlleirlarvaeandeggs are sometimes used to estimatethetimesincedeath intheactual features 啪’t ide而匆most ofthelarvaeand -breeding fliesand meir larvae onthecorpses of ratswerecoll