文档介绍：实验四氨基酸纸层析
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一、实验目的
１、本实验采用纸色谱对几种氨基酸进行分离和鉴定,以了解纸色谱的原理，练****其操作方法。
2 、了解测定折光率的简单原理，掌握阿贝折射仪的使用方法。
第2页，本讲在一定的外界(如温度、压力等)条件下，波长一定的单色光从介质A斜射入介质B时，要发生折射现象。其入射角α与折射β的正弦之比是一个常数，并且与这两个介质的折射率nA(介质A)、nB(介质B)成反比。即：
根据折射定律可得：
当
则
所以
(折射角的最大值，称为临界角 )
时sin0=1
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在临界角以内的区域都有光线通过,是明亮的，在临界角以外的区域没有光线通过，是暗的。在临界角上正好是“半明半暗”（如图4-2所示）。目镜上有一个十字交叉线，若十字交叉线与明暗分界线重合，就表示光线由被测液体进入棱镜时的入射角正好为90。
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由于 ,棱镜的折光率nB是常数，各种液体的折光率不同，临界角也不同。通过测定临界角的相对位置，经过换算就可以找出液体的折光率，阿贝折光仪的刻度是经过换算后的折光率的读数，故可直接读出折光率。
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阿贝(Abbe)折光仪
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阿贝(Abbe)折光仪
阿贝（Abbe）折光仪的结构如图。它的主要组成部分是两块直角棱镜组成的棱镜组，上面一块是表面光滑的测量棱镜，下面一块是表面磨砂的可以开启的辅助棱镜。左面的镜筒是读数镜筒，内有刻度盘，其上面有两行数值。右边一行是折射率数值（～），左边一行是工业上测量溶液浓度的标度（0～95%）。右面的镜筒是测量目镜，用来观察折光情况。筒内装有消色散棱镜。光线由反射镜射入辅助棱镜，发生漫射，以不同人射角射入液层，然后再射到测量棱镜的表面上。此时一部分光线经折射后进入测量目镜，另一部分光线则发生全反射。调节螺旋，以使测量目镜中的视野 半明半暗。
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三、实验步骤
（一）纸层析
1．在滤纸条上端边缘约1厘米的中央剪一小孔。
2．将滤纸条平放于洁净的纸上，在距离滤纸下端1cm处用铅笔轻画一横线，并在横线的中央画一直径为2mm的小圆圈。
3．用毛细管吸取氨基酸混合液，在滤纸条下端的小圆圈内点样。
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4. 取干燥大试管，加入被水饱和的酚溶液10ml，注意勿使溶液沾到试管壁上，将试管垂直固定于铁架台上。
5. 。从滤纸条上端小孔处穿棉线并左右分开，，注意勿使点样点浸入溶液中，亦勿使滤纸条接触试管壁。
6. 此时即可看到溶剂向上移动，溶剂升到一定高度时，小心将纸条取出，以铅笔标出溶剂上升的前沿。
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7. 将滤纸条两端，用大头针钉在小木框上，%茚三***乙醇溶液，然后再将滤纸条吹干，即可看到纸上显出三色点，每个色点代表一种氨基酸。
8. 分别测量并计算三种氨基酸的Rf，再根据教师供给的值确定此三个色点各为何种氨基酸。
9. 留在试管内的酚溶剂切勿弃去，塞紧塞子。
氨基酸
Rf值
蛋氨酸
丙氨酸
谷氨酸
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（二）折光率的测定
1、折光仪读数的校正
（1）将阿贝折光仪置于普通白炽灯前或靠近窗户的桌子上。但不要放在直射的阳光下，以免液体试样迅速蒸发。将温度计插人金属匣中，然后接道恒温水，恒温20min左右。恒温温度可以从温度计中读出。
（2）旋开棱镜锁紧扳手，开启铺助棱镜，用按镜纸蘸少量乙酸（或***）轻轻揩拭镜面。待镜面干燥后，滴加1～2滴蒸馏水于辅助棱镜面上，旋紧棱镜锁紧扳手，使蒸馏水均匀地充满视场，注意不要有气泡。
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（3）调节反光镜，使从测量目镜中观察到的视场最亮。调节目镜，使聚焦于“十”字的支点上。调整消色散棱镜手轮，使视场中呈现黑白分界线。转动棱镜转动手轮，使黑白分界线恰与“十”字的交点重合。
（4）记下蒸馏水的折光率，重复操作2～3次，与标准值比较，得到零点的校正值。
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2、加样
打开棱镜，用擦镜纸(必要时用丝绢沾少量乙醇或***)轻轻擦洗上下镜面，要单向擦，不要来回擦。待溶剂挥发后，滴1～2滴待测液体于磨砂棱镜面上,小心地关闭棱镜，使液体铺满整个镜面 。
3、对光
调节反光镜使