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纸层析法分离鉴定氨基酸.ppt

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纸层析法分离鉴定氨基酸.ppt

上传人:文库新人 2022/1/18 文件大小:2.68 MB

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纸层析法分离鉴定氨基酸.ppt

文档介绍

文档介绍:纸层析法分离鉴定氨基酸
第1页,本讲稿共10页
将样品点在距滤纸一端约2~3cm的某一处,该点称为原点;然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层,这样混合氨基酸在两相中不断分配。由于分配系数(Kd)不同,结果它们纸层析法分离鉴定氨基酸
第1页,本讲稿共10页
将样品点在距滤纸一端约2~3cm的某一处,该点称为原点;然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层,这样混合氨基酸在两相中不断分配。由于分配系数(Kd)不同,结果它们分布在滤纸的不同位置上。物质被分离后在纸层析图谱上的位置,可用比移值(Rf)来表示。
所谓Rf,是指在纸层析中,从原点至氨基酸停留点(又称为层析点)中心的距离(X)与原点至溶剂前沿的距离(Y)的比值。如图
第2页,本讲稿共10页
第3页,本讲稿共10页
在一定条件下(如温度、展层剂的组成、层析纸质量等不变),某种物质的Rf 值是常数,因此可作为定性依据。
由于氨基酸无色,可利用茚三***反应使氨基酸层析斑点显色,从而作定性分析。本实验利用纸层析法分离氨基酸。
第4页,本讲稿共10页
三、操作
1. 在层析缸中装入展层剂,~2cm。
2. 准备滤纸: 戴上手套,取层析滤纸(长22 cm、宽14 cm)一张,在纸的一端距边缘3cm处用铅笔画一条直线,在此直线上每间隔2cm作一记号,为点样位置(即原点),如图。注意事项:手不能直接接触滤纸;直线与底边平行。
3. 点样:用毛细管依次将Lys(赖) 、 Gly(甘) 、 Pro(脯)、Val (缬)、 Leu (亮)和混合样品分别点在这6个位置上,点样点干后再点一次。注意每点在纸上扩散的直径,最大不超过3mm。
第5页,本讲稿共10页
纸层析点样标准图
Lys Gly Pro Val Leu 混合样品
第6页,本讲稿共10页
4、展层:将点好样的滤纸(点样面朝外)卷成筒状,用透明胶纸粘接或用线缝好,纸的两边不能接触。将滤纸直立于层析缸中(注意:点样的一端在下,展层剂的液面需低于点样线1cm ,滤纸勿与缸壁接触),盖好层析缸盖,进行展层。待溶剂上升15~20 cm时,取出滤纸,用铅笔描出溶剂前沿界线,电吹风吹干。
5、显色: