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Transwell 实验总结.doc

上传人:晴雯 2022/1/18 文件大小:27 KB

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Transwell 实验总结.doc

文档介绍

文档介绍:Transwell 实验总结
第一节 概念
这里想明确两个概念,一个是Transwell,另一个是肿瘤细胞侵袭模型。
1.Transwell
关于Transwell这个词该如何解释,查了很多资料也未见准确的注解,我觉得可培养法
2.2.1.1 半固体培养基单细胞器官培养法
2.2.1.2 液体培养基单细胞器官培养法
2.2.2 半体外半体内器官培养法
2.2.3 单层细胞器官培养法
2.2.4 瘤细胞球体器官培养法
2.2.4.1 静止球体器官培养法
2.2.4.2 旋转摇动球体器官培养法
2.2.5 单层细胞侵袭实验模型
2.2.6 Transwell侵袭小室测定法可见,Transwell与侵袭实验之间并不能划等号,Transwell有多种应用,侵袭实验也有多种方法。所谓Transwell侵袭实验,其实是指将Transwell这一技术应用于肿瘤细胞侵袭研究的一种实验。由于其简单易行、重复性好,因而得到了越来越广泛的应用,但不能认为研究肿瘤侵袭只有Transwell一种方法。第二节 Transwell侵袭实验
我的课题涉及Transwell侵袭实验和Transwell迁移实验,其他方面的Transwell应用我不太清楚,因此这里主要谈谈Transwell侵袭实验。
1.实验用品:
Fig6

① Transwell小室:
多种厂家可提供,论坛里常用的是Costar、Corning、BD生产的小室,我们实验室用的是Chemicon公司的ECM550系列,另有Boyden chamber、Millipore公司的millicell和雕弓满月射天狼战友介绍的Thincert。
这些厂家提供的小室,有的已铺好基质胶,买来就可以用,很方便,但也比较贵,我们实验室用的Chemicon公司的ECM550系列是已经铺好胶的,质量很好,但是非常贵,24孔板配套的小室,每个价格约130元,不推荐给大家。BD也有已包被好的,价格不清楚。Coster和Corning公司生产的小室,是论坛里比较常用的,好像是要自己铺胶,但据说每个小室成本只有40左右,应该比较适合中国国情。
下面是一些战友提供的价格,具体建议大家联系代理商咨询。linanping1979战友提供的价格:coster的24孔板的transwell的价格是456元RMB,8µm,用于肿瘤的侵袭实验。iceyxy战友提供的价格:Millipore的8µm的50个1760RMB,µm的2000多,是一次性的。梅林战友提供的BD价格: 240RMB一块(,24孔,12instert),好像是没胶的。liguofan说国产的boyden30块一个。jjyy提供的价格是:corning cat . transwell with prore polycarbonate membrane insert, Qty 48,950人民币不到。平均每个20元不到。
Transwell小室按照公司的要求,都是一次性使用的。不过其实洗洗泡泡还是可以重复用的。我用的Chemicon公司的ECM554,用完后擦去基质胶,再用胰酶和75%酒精泡,可以把膜洗得很干净,用前用紫外里外都照30min。sword01战友提供的处理方法:用棉签轻轻擦去胶和反面细胞,清水冲洗,超声清洗,低挡,30min,清水3×5min,蒸馏水3×5min,室温凉干,用前紫外线小室正面3h,反面6h,微波,低火10min×2。
因为我买的是铺好胶的,所以没买Matrigel,二次利用的小室只用来做不需要铺胶的迁移实验。以前的Chemicon ECM550系列,膜很结实,擦不坏,可以反复用很多次,但现在的膜已经改用一种很薄很脆的材料,一般只能重复用一次,真黑啊!很多战友说Costar和Corning也是可以重复用的,大家可以试试。
victoh战友对Millipore公司的millicell有比较详细的讲解,链接如下:
本人没见过,有兴趣的可以自己研究一下。
另外,根据论坛战友提供的信息,osmonic公司有专用的膜出售,鼎国生物代理。Transwell小室用过后,可把原来的膜切下,贴上osmonic公司的膜,这样又可以用了,不过我没用过,有兴趣的可以试试。maojianwen战友的使用方法: trasnwell小室做一次后,将原来的膜去掉,重新泡酸,泡酒精,使用前照紫外,然后用女士用指甲油(注意用无色较稀的)将osmonic公司的膜贴上,剪掉多余的