文档介绍：TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO.,LTD TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO.,LTD ― qPCR 系统“从 RNA 提取到荧光定量 PCR ”解决方案内容概要?荧光定量 PCR 的原理?荧光定量 PCR 的标记方法?荧光定量 PCR 解析方法? SYBR 法实验流程及注意事项? TIANGEN 公司荧光定量产品选择指南实时定量 PCR 技术: 利用荧光信号的变化实时检测 PCR 扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化,通过 Ct值和标准曲线的关系对起始模板进行定量分析与常规 PCR 技术比较: 对 PCR 扩增反应的终点产物进行定量和定性分析, 无法对起始模板准确定量,无法对扩增反应实时检测荧光定量 PCR 原理-- 定义?扩增曲线?荧光阈值? Ct 值荧光定量 PCR 原理-- 常用名词概念 Cycle (循环数) Rn (荧光强度) Baseline Lg - liner phase 平台期荧光基团荧光检测元件荧光定量 PCR 原理-- 扩增曲线 Cycle (循环数) Rn (荧光强度) Baseline Lg - liner phase ?前15个循环信号作为荧光本底信号( baseline ) ?荧光阈值的缺省设置是 3~15个循环的荧光信号的标准偏差的 10倍?手动设置:大于荧光背景值和阴性对照的荧光最高值;进入指数期的最初阶段?真正的信号:荧光信号超过阈值 Threshold 荧光定量 PCR 原理-- 荧光阈值平台期 Ct 值的定义: PCR 扩增过程中,扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数 Cycle (循环数) Rn (荧光强度) Ct value 荧光定量 PCR 原理-- Ct 值横轴: PCR 反映循环数纵轴荧光信号量 Ct 值的特点: 相同模板进行 96 次扩增,终点处产物量不恒定; Ct值极具重现性 Ct 值的重现性理想的 PCR 反应 X n=X 0 2 n*X n:第 n次循环后扩增产物数量 X 0:起始模板数量 n:扩增循环数荧光定量 PCR 原理-- Ct 值定量的数学原理非理想的 PCR 反应 X n=X 0(1+ En ) n*X n:第 n次循环后扩增产物数量 X 0:起始模板数量 n:扩增循环数 En :扩增效率荧光定量 PCR 原理-- Ct 值定量的数学原理