文档介绍：食品微生物中细菌菌落总数的测定
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一、  目的
1、  学****并掌握食品中菌落总数测定方法和原理。2 、了解菌落总数测定在对被样品进行卫生学评价中的意义。
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二、原食品微生物中细菌菌落总数的测定
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一、  目的
1、  学****并掌握食品中菌落总数测定方法和原理。2 、了解菌落总数测定在对被样品进行卫生学评价中的意义。
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二、原理
细菌数量的表示方法由于所采用的计数方法不同而有两种：菌落总数和细菌总数。
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1、菌落总数
是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1mL检样中形成的细菌菌落总数。以 CFU/g（mL）来表示。
一定条件包括培养基成分、培养温度和时间、pH、是否需要氧气等。
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按国家标准方法规定，即在需氧情况下， 36 ±1℃培养48±2 h，能在平板计数琼脂上生长发育的细菌菌落总数。所以厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中温的细菌，由于现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。
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食品中细菌菌落总数越多，则食品含有致病菌的可能性越大，食品质量越差；菌落总数越小，则食品含有致病菌的可能性越小。须配合大肠菌群和致病菌的检验，才能对食品做出较全面的评价。
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2、细菌总数
指一定数量或面积的食品样品．经过适当的处理后，在显微镜下对细菌进行直接计数。其中包括各种活菌数和尚未消失的死菌数。细菌总数也称细菌直接显微镜数。通常以1 g或1 mL样品中的细菌总数来表示。
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三 、 材料
1、 食品检样 2、 培养基平板计数培养基，无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液 3、 其它无菌培养皿，无菌吸管，电炉、恒温培养箱等。
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四、  流程
1、检样
2、做几个适当倍数的稀释液
3、选择2~3个适宜稀释度各1 mL,分别加入灭菌平皿内
4、平皿内倾注15～20 mL琼脂培养基，混匀
5、36 ±1℃培养48±2小时或（24±2）小时
6、记录稀释倍数和相应的各平板菌落数量
7、计算菌落总数 → 报告
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五、  步骤
(一)     取样、稀释和培养 1、 以无菌操作取检样25g（mL），放于225mL灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振荡或研磨制成1:10的均匀稀释液。
固体和半固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000～10000r/min的速度处理1～2min，制成1:10的均匀稀释液。
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2、用1 mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1 mL，沿管壁徐徐注入含有9 mL灭菌生理盐水或磷酸盐缓冲液的试管内，振摇试管或反复吹打混合均匀，制成1:100的稀释液。
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3 、另取1 mL灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1 mL吸管。
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4、根据标准要求或对污染情况的估计，选择2～3个适宜稀释度，分别在制作10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。
同时分别取1ml稀释液（不含样品）加入两个灭菌平皿内作空白对照。
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5 、稀释液移入平皿后，将冷却至46℃琼脂培养基注入平皿约15～20ml，并转动平皿，混合均匀。
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6、 待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h，水产品30±1℃温箱内培养72±3h。
如样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4毫升），凝固后培养。
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（二） 菌落记录方法做平板菌落数记录时，可用肉眼观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落总数后，求出同稀释度的各平板平均菌落数。
到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放置于0～4℃，但不要超过24h。
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1、 平皿菌落数的选择选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定标准。每一个稀释度应采用两个平皿，大于300的可记为多不可计。
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2、其中一个平板有较大片状菌落生长时，则