文档介绍：固定化酶与固定化细胞
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，稳定性差（热、酸碱、有机溶剂对其有影响）。
，使用成本高。
，也使产物中混杂酶蛋白
游离酶的缺点：
2）偶联方法：
偶联成功与否取决于：
载体：功能基团：芳香氨基，羧基，羧***等。
酶分子:侧链非必需基团：羧基，巯基，羟基，酚基，咪唑基。
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常用的偶联反应有：重氮化法、叠氮法、溴化***法、烷基化法等。
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优点：酶与载体结合牢固，不会轻易脱落，可连续使用。
缺点：反应条件较激烈，易影响酶的空间构象而影响酶的催化活性。
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（crosslinking）
借助双功能试剂使酶分子之间发生交联的固定化方法。
双功能试剂：
常用的是戊二醛
O O
H — C — CH2 — CH2 — CH2 — C — H
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戊二醛有两个醛基，均可与酶或蛋白质的游离氨基反应,使酶蛋白交联。
此法与共价偶联法利用的均是共价键，不同之处：交联法不使用载体。
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交联反应既能发生在分子间，也可发生在分子内。
酶浓度低时，交联发生在分子内，酶仍保持溶解状态。
酶浓度高时，交联发生在分子间，酶变为不溶态。
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缺点：
(1)反应条件激烈，酶分子的多个基团被交联，酶活力损失大。
(2)制备的固定化酶颗粒较小，给使用带来不便。
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4. 包埋法（entrapment）
将酶用物理的方法包埋在各种载体（高聚物）内。分为：
网格型：将酶包埋在高分子凝胶细微网格中。
微囊型：将酶包埋在高分子半透膜中。
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1）网格型包埋法
（gel (lattic) entrapment）
又称凝胶包埋法
凝胶
包埋条件
酶活性
强度
天然凝胶
琼脂、海藻酸钙、角叉菜胶、明胶
温和
不变
差
合成凝胶
聚丙烯酰***、光交联树脂
聚合反应
部分失活
高
使用的多孔载体及其特点
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海藻酸钙凝胶包埋法：
滴至
海藻酸钠溶液＋E (or cell) CaCl2 溶液中 IE(or IC)
角叉菜胶包埋法：
滴至
角叉菜胶＋E (or cell) KCl 溶液中 IE (or IC)
聚丙烯酰***凝胶包埋法：
AP
Acr+ Bis+E (or cell) IE (or IC)
TEMED
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2）微囊型包埋法
（microencapsulation）
又称半透膜包埋法
将一定量酶液包在半透性的高分子微孔膜内 。
半透膜：直径几十微米到几百微米，厚约25nm。
半透膜孔径<酶分子孔径，小于半透膜孔径的小分子底物和产物可以自由进出，被称为“人工细胞”。
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与网格型包埋法相比，微囊型包埋法的优点：
1）固定化酶颗粒小，有利于底物和产物扩散。
2）半透膜能阻止蛋白质分子渗漏和进入，注入体内既可避免引起免疫过敏反应，也可使酶免遭蛋白水解酶的降解，具有较大的医学价值。
缺点：反应条件要求高,制备成本也较高。
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包埋法是目前应用最多的一种较理想的方法，与其它固定化方法相比：
优点：不与酶蛋白氨基酸残基反应，很少改变酶的高级结构，酶活回收率高。
缺点：只适合作用于小分子底物和产物的酶。
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吸附法 共价偶联法 交联法 包埋法
酶的四种固定化方法
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固定化方法
吸附法
包埋法
共价结合法
交联法
物理吸附法
离子吸附法