时间分辨荧光免疫分析技术.ppt

文档介绍：时间分辨荧光免疫分析技术
标记免疫学分析技术发展历程
免疫荧光分析(Coons, 1941)
放射免疫分析(Berson和Yalow, 1960)
酶免ELISA (Engvall, 1971)
金标免疫分析(Faulk和Tay钐（Sm)，铽 (Tb) ，镝 (Dy)
等，它们的荧光光谱具有特异性强﹑ Stokes位移大﹑寿命长
的特点
DELFIA采用异硫***酸苄基二亚乙基三***四乙酸铕(DTTA-Eu)
为双功能螯合试剂，其一端螯合Eu3+，另一端可与蛋白质的-
NH2 连接。在中性或接近中性pH 条件下，DTTA 与Eu3+具
有足够的螯合稳定性，而在增强液（呈酸性）作用下，DTTA-
Eu 又能将螯合的Eu3+迅速、彻底地释放出来并与增强液中的
配体螯合﹑进入胶束的疏水内核，使Eu3+荧光得以成千万倍地
放大
FIAgen采用的是以Eu3+螯合物配基BCPDA为标记物，
通过检测其与过量Eu3+形成的螯合物荧光进行定量。由于
BCPDA 的可检测性不够理想，FIAgen 需要利用生物素-
亲合素信号放大来弥补BCPDA 检测灵敏度的不足
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2021/1/12
DELFIA标记技术
碱性
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2021/1/12
时间:(µs）
0
400
800
1000
340nm激发光
第二个循环
荧光
短寿命荧光
613nm长寿命荧光
延迟时间
测值时间
通过时间延迟，将特异性荧光与非特异性荧光
分辨开来，使理论本底达到0
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2021/1/12
300
400
500
600
荧光强度
激发光
发射光
波长(nm)
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2021/1/12
Tb
Dy
Eu
Sm
500
发射光强度
200
400
0
延迟时间(µs)
600
发射光波长(nm)
500
发射光强度
0
延迟时间(µs)
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2021/1/12
TRFIA技术特点
极长的荧光衰退时间
铕：730000ns
Stokes位移大
铕：激发光340nm，发射光613nm
狭窄的发射峰
解离-增强技术可使其荧光性提高100万倍
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2021/1/12
固相包被抗体
铕标记抗体
孵育
Eu
待测抗原
+
+
Eu
Eu
+
增强液
+
Eu
双抗体夹心法示意图
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2021/1/12
双抗原夹心法示意图
Eu
+
+
孵育
+
Eu
孵育
增强液
+
Eu
固相包被抗原
待测抗体
铕标记抗原
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2021/1/12
中和法示意图(回滴定法)
+
+
孵育
+
Eu
孵育
Eu
Eu
增强液
+
+
Eu
待测抗体
铕标记抗体
中和抗原
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2021/1/12
小分子抗原竞争抑制示意图
固相包被二抗
+
孵育
+
+
Eu
孵育
Eu
待测抗原
铕标抗原
Eu
增强液
+
+
Eu
一抗
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2021/1/12
时间分辨技术重点和难点
固定相（96孔板）
标准品
铕标记物
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2021/1/12
二、时间分辨荧光免疫分析（TRFIA）测试仪
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2021/1/12
目前的TRFIA测试仪：
国外仪器（Wallac公司<PerkinElmer>）
国内其他公司生产的仪器(上海新波、广州丰华等)
达瑞抗体公司自主研发的仪器及软件（DR-M6601）
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2021/1/12
Wallac AutoDELFIA 1235
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2021/1/12
半自动 VICTOR2 1420
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2021/1/12
半自动 ANYTEST2000
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2021/1/12
DR-M6601时间分辨荧光免疫分析仪
【粤食药管械（准）字2005第2400226】
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2021/1/12
达瑞公司开发的系列TRF试剂
内分泌科检查
甲状腺系列：T3、T4、FT3、FT4、TSH、
TBG、TG、TGAb、TPoAb
糖尿病系列：insulin