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DNA提取试剂的作用.doc

上传人:zxwziyou9 2022/1/22 文件大小:17 KB

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文档介绍

文档介绍:DNA提取试剂的作用
1. CTAB(十六烷基三***溴化铵):是一种阳离子去污剂,(> NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸DNA提取试剂的作用
1. CTAB(十六烷基三***溴化铵):是一种阳离子去污剂,(> NaCl),CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物,,去除蛋白,多糖,:CTAB溶液在低于15℃ 时会形成沉淀析出,因此在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热,且离心时温度不要低于15℃.
2.Tris-HCl : 提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏;3. EDTA: 螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性;4. NaCl: 提供一个高盐环境,使DNP充分溶解,存在于液相中;5. β-巯基乙醇:抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除。
6. PVP(聚乙烯吡咯烷***):酚的络合物,能与多酚形成一种不溶的络合物质,有效去除多酚,减少DNA中酚的污染;同时它也能和多糖结合,有效去除多糖.
7.***仿:使蛋白变性并有助于液相与有机相的分开
。***仿是强蛋白质变性剂,抑制RNA酶的活性,除去蛋白质污染。
:它是糖苷水解酶,能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键,
:SDS是离子型表面活性剂,溶解膜蛋白而破坏细胞膜,解聚细胞中的核蛋白,使蛋白质变性而沉淀下来。
/L NaAc: 有利于变性的大分子染色体DNA、RNA以及SDS-蛋白复合物凝聚而沉淀之。
:乙醇会夺去DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合
13.
蛋白质的去除:酚/***仿抽提;使用变性剂变性(SDS,异硫***酸胍等)
多糖的去除:高盐法:用乙醇沉淀时,在待沉淀溶液中加入1/2体积的5M NaCl,高盐可溶解多糖.
多酚的去除:在抽提液中加入防止酚类氧化的试剂:β-巯基乙醇,抗坏血酸,半胱氨酸,二硫苏糖醇等加入易与酚类结合的试剂:如PVP(聚乙烯吡咯***),PEG(聚乙二醇),它们与酚类有较强的亲和力,可防止酚类与DNA的结合盐离子的去除:70%的乙醇洗涤核酸吸附,沉淀和溶解使用合适的吸附材料吸附核酸,
4.为什么用无水乙醇沉淀DNA?
用无水乙醇沉淀DNA,这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶,乙醇与核酸不会起任何化学反应,对DNA很安全,因此是理想的沉淀剂。
DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在,当加入乙醇时,乙醇会夺去DNA周围的水分子,使DNA失水而易于聚合。一般实验中,是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合,其乙醇的最终含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇来替代无水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵)。但是加95%的乙醇使总体积增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA损失也增大,尤其用多次乙醇沉淀时,就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95%乙醇代替无水乙酵,最后的沉淀步骤要使用无