文档介绍：实验九 DNA的酶切
一、原理
1．三类限制酶
限制酶特异地结合于其识别的特殊DNA序列之内或附近的特异位点上，并在此切割双链DNA。限制酶可分为3类。I类和Ⅲ类限制酶在同一蛋白质分子中兼有修饰(甲基化)作A纯度
酶切反应要求最严的成分时底物DNA，酶要产物直接受DNA底物纯度的影响。
提取过程种的酚、氯仿、乙醇、EDTA、SDS、NaCl均能干扰反应，有些甚至改变识别序列特性，处理办法为酶切前透析或乙醇沉淀。
B、DNA浓度
DNA浓度太稀、加量大，含有EDTA影响结果。
C、识别序列位点，及与其相邻的特异性。
限制性内切酶对DNA序列显示高度特性，因此，识别序列内核苷酸的甲基化或糖苷化都会影响酶切反应，识别位点接近末端的程度也影响切割，如EcoRI要求识别序列后在末端至少有一个碱基存在才能切割。
各种内切酶对识别序列处于末端位置时的切割效率不同，下表列出了用20U常用内切酶在20℃。
表4 常用内切酶对识别序列接近末端的DNA的切割效率
AccI GGTCGACC 8 0 0
CGGTCGACCG 10 0 0
CCGGTCGACCGG 12 0 0
AfiⅢ CACATGTG 8 0 0
CCACATGTGG 10 >90 >90
CCCACATGTGGG 12 >90 >90
AscI GGCGCGCC 8 >90 >90
AGGCGCGCCT 10 >90 >90
TTGGCGCGCCAA 12 >90 >90
AvaI CCCCGGGG 8 50 >90
CCCCCGGGGG 10 >90 >90
TCCCCCGGGGGA 12 >90 >90
BamHI CGGATCCG 8 10 25
CGGATCCCG 10 >90 >90
CGCGGATCCGCG 12 >90 >90
BgLⅡ CAGATCTG 8 0 0
GAAGATCTTC 10 75 >90
GGAAGATCTTCC 12