文档介绍：实验需知
实验分组：2个实验室，每个实验室分6组（名单上报），每次实验结束留1组同学值日
实验成绩：占期末总成绩的20%，包括实验出勤、实验操作、实验结果及实验报告撰写
实验结束：将实验用品收拾整齐，由实验老师确认实验结束后方可离开
实验实验需知
实验分组：2个实验室，每个实验室分6组（名单上报），每次实验结束留1组同学值日
实验成绩：占期末总成绩的20%，包括实验出勤、实验操作、实验结果及实验报告撰写
实验结束：将实验用品收拾整齐，由实验老师确认实验结束后方可离开
实验报告：实验目的、实验原理、实验步骤（注意事项）、实验结果、思考题
第一页，共26页。
系列实验内容
实验1 土壤中产淀粉酶菌株的筛选 （1、2）
实验2 产淀粉酶菌株的诱变剂量选择
实验3 紫外诱变剂突变菌株的初筛
实验4 紫外诱变剂突变菌株的复筛
实验5 高产淀粉酶生产菌株的稳定性及淀粉酶活力测定
第二页，共26页。
背景知识
淀粉酶（amylase, Amy, AMS ）：
能水解淀粉、糖原和有关多糖中的O-葡萄糖键的酶
药物：助消化药，治疗功能性消化不良
第三页，共26页。
背景知识
产淀粉酶微生物：细菌、真菌等
菌种分离与筛选步骤：
采样——培养——分离——筛选
诱变育种步骤：
诱变——初筛——复筛——性能检测
第四页，共26页。
背景知识
第五页，共26页。
实验1
土壤中产淀粉酶菌株的筛选（1）
第六页，共26页。
实验目的
掌握菌种分离与筛选的方法
从土壤中筛选出能够合成分泌淀粉酶的微生物
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实验原理
自然界微生物种类繁多，有些微生物能够以淀粉作为碳源进行生长繁殖，这是因为它们能够合成分泌淀粉酶。
当能合成淀粉酶的微生物在含有淀粉的固体培养基中生长时，会将淀粉酶分泌到菌体周围，使菌落周围的淀粉水解成为小分子量的糊精、聚糖和单糖。这些水解产物不能与碘作用，从而在菌体周围形成透明圈。
第八页，共26页。
实验步骤
1. 筛选培养基的配制（已完成）
可溶性淀粉2 g，NaCl 5 g，牛肉膏5 g，蛋白胨10 g，琼脂20 g，水1000 mL。
2. 倒平板（每组6个，每个平板10mL左右）
第九页，共26页。
实验步骤
3. 土样的采集
各实验室分别取三种不同环境的土样并记录当时取样环境情况（1-2、3-4、5-6每两小组在同一个地方进行取样），通常取离地面5～15cm处的土壤。
4. 稀释分离
取土样1 g，加入9 mL无菌水，逐步稀释至105、106、107 （单数组）或106、107、108（双数组） ，每个梯度涂2个平板。
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10ml
1g
9ml
9ml
9ml
9ml
9ml
9ml
10-1
10-2
10-7
10-6
10-5
10-4
10-3
1ml
1ml
1ml
1ml
1ml
稀 释
1ml
第十一页，共26页。
第十二页，共26页。
分离
第十三页，共26页。
实验步骤
，置于30 ℃恒温培养48 h（倒置培养？？）
6. 产淀粉酶菌株的鉴定（下次课）
第十四页，共26页。
6. 产淀粉酶菌株的鉴定
倒平皿（注意培养基状态、体积、表面平整）：3个
用接种环挑取单菌落到无菌瓶皿上（点植法：用接种环在固体培养基表面接触几点），同时用签字笔按对应顺序对各单菌落进行标号。
在原培养皿表面喷洒稀碘液，记录有水解圈的单菌落，与此对应找出合成淀粉酶的菌株1-2株。
注意：未分离得到菌落的小组可与其他组合作，挑取其他组鉴定得到的菌落进行后续实验（实验报告中注明使用哪一组的菌落）。
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7. 产淀粉酶菌株的增殖培养
液体培养基分装：10ml/瓶，每个菌株对应1瓶（每组1-2瓶，参考鉴定结果）
液体培养基接种：用接种环从固体培养基表面上沾取少许菌苔，将接种环在液体培养基内振摇几次即可。
做好标记，放入摇床中振荡培养24h。
第十六页，共26页。
8. 产淀粉酶菌株的纯化——平板划线法
灼烧接种环，冷却后用接种环挑取少量菌苔
左手持平皿，将皿盖打开一条缝隙，右手将接种环伸入皿中，划3-4条平行线
灼烧接种环，60°旋转平皿，划线（注意：后一区要求与前一区首尾相连，但不得与其他区域搭在一起）
灼烧接种环，将划线平板倒置，于30℃培养48h后观察。
第十七页，共26页。
第十八页，共26页。
实验结果及分析
1. 取样环境情况
2. 记录产淀粉酶菌株数量（比透明圈？？）及对菌落的初步鉴定结果
3. 分析：从不同地点获得的结果为什么会出现差异？可以初步得出什么样的结论