文档介绍：可见紫外分光光度法 (2)
第1页，本讲稿共32页
主要内容
第一节物质的吸收光谱
第二节分光光度法基本原理
第三节可见分光光度法
第四节提高测量灵敏度和准确度的方法
第五节紫外分光光度法简介
第2页，本讲稿共3251，L-1的溶液，%，求该化合物在上述条件下的摩尔吸光系数及质量吸光系数a。
解：
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第二节    分光光度法基本原理
例：测试酶与腺苷酸(AMP)体系的吸光度如下
A(280nm) = ， A(260nm) = ，试计算
每一组分的浓度。
已知：酶的(280nm) = 104Lmol-1cm-1
　　　　　(260nm) = 104Lmol-1cm-1
　　　AMP的(280nm) = 103Lmol-1cm-1
　　　　　　(260nm) = 104Lmol-1cm-1
　　　。
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第三节可见分光光度法
一分光光度计
　分光光度计仪器型号很多，但其基本原理相似，其主要部件用方框图示意如下　光源 →单色光器 →吸收池 →检测器 →讯号处理及显示器
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第三节可见分光光度法
二、测定方法
　　　可见分光光度法常用于定量测定，根据Lambert-Beer定律，在一定波长条件下，吸光度与浓度成正比，因此在分光光度计上测出吸光度，通过下列方法即可求出被测物质含量:
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第三节可见分光光度法

在测定溶液吸光度时，为了消除溶剂或其它物质对入射光的吸收，以及光在溶液中的散射和吸收池界面对光的反射等与被测物吸收无关的因素的影响，必须采用空白溶液(又称参比溶液)作对照。常用的空白溶液有下列三种。①溶剂空白 ②试剂空白 ③试样空白
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第三节可见分光光度法
2. 标准对照法
先配制一个与被测溶液浓度相近的标准溶液(其浓度用cs表示)，在max处测出吸光度As，在相同条件下测出试样溶液的吸光度Ax，则试样溶液浓度cs可按下式求得： cx = cs Ax/As
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第四节 提高测量灵敏度和准确度的方法
一、分光光度法的误差
　　分光光度法的误差主要来自以下几方面：

测定条件：均匀稳定的稀溶液，单色光。
，A为～, 误差较小。
。
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第四节 提高测量灵敏度和准确度的方法
二　选择合适的显色剂
条件：

　　
　　
　　
　　。
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第四节 提高测量灵敏度和准确度的方法
三、选择合适的测定条件（入max）；
　；
　（A – pH曲线）；
　（A – t曲线）；
　 A = ~ 范围;
　。
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第五节紫外分光光度法简介
一、751-G型分光光度计
二、紫外分光光度法的应用

比较max、(max)或a(max)
比较吸光度(或吸光系数的比值)

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第五节紫外分光光度法简介
例已知维生素B12的α(361nm) = g-1cm-1。，加水溶解后稀释至1000ml，，计算样品溶液中维生素B12的质量分数。
解所测样品溶液中维生素B12的质量浓度：
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本章小结
分光光度法是根据物质的吸收光谱及光的吸收定律，对物质进行定性、定量分析的一种方法。
以入射光的波长()为横坐标，溶液的吸光度(A)为纵坐标画出的曲线，即吸收光谱，吸收光谱中吸光度最大的波长，为最大吸收波长，用max表示。
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本章小结
分光光度法测定物质含量的依据是Lambert-Beer定律，即A =bc，此处c为物质的量浓度，称为摩尔吸光系数，若用质量浓度代替物质的量浓度c，则相应地改为a，A =ab，a为质量吸光系数，a与及物质的摩尔质量M之间的关系为：