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实验一 微生物培养基的制备与灭菌〔8课时〕
一、目的要求
1、学****配制微生物培养基的一般方法和步骤。
2、掌握高压蒸汽灭菌的原理和操作方法。
二、根本原理
正确掌握培g琼脂粉，塞好棉塞，用报纸包好瓶口并用棉线包扎好，灭菌。
B、将洗净烘干的培养皿用报纸包扎好，灭菌。
C、在超净工作台中，将装在三角瓶中已灭菌的琼脂培养基冷至50℃左右倾入无菌培养皿中。温度过高时，皿盖上的冷凝水太多；温度低于50℃，培养基易于凝固而无法制作平板。平板的制作应在火旁进展，左手拿培养皿，右手拿三角瓶的底部，左手同时用小指和手掌将棉塞打开，灼烧瓶口，用左手大拇指将培养皿盖打开，倾入10-15ml培养基，迅速盖好皿盖，置于桌上，轻轻旋转平皿，使培养基均匀分布于整个平皿中，冷凝后即成平板。
〔2〕斜面培养基
A、用量筒量取100ml培养基，倒入一个烧杯中，参加2g琼脂粉，置于石棉网上加热，用玻璃棒搅动溶解至琼脂粉溶解。
B、将洗净烘干的试管放置在试管架上，用注射器将融化琼脂粉的培养基倒入试管至试管高度的1/4处。
注意：不要将试管口弄脏。
C、待培养基冷却凝固后，塞上棉塞，以2支或4支为一组，用报纸将试管口包扎好，灭菌。
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D、灭菌后，趁热将试管口端搁在一根长木条上，并调整斜度，便斜面的长度不超过试管总长的1/2。
10．无菌检查 将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24～48h，无菌生长即可使用，或贮存于冰箱或清洁的橱内，备用。
〔三〕培养基的灭菌
培养基经分装包扎后，应立即按配制方法规定的灭菌条件进展进展高压蒸汽灭菌。
〔四〕培养基的灭菌检查
灭菌后的培养基，一般需进展无菌检查。最好取出1-2管〔瓶〕，置于37℃温箱中培养1-2天，确定无菌后方可使用。
五、实验内容
1、根据要求清洗各种玻璃器皿，并进展烘干和包扎。
2、根据要求配制微生物培养基。
3、掌握用高压蒸汽灭菌锅对培养基灭菌。
4、掌握液体培养基、平板培养基和斜面培养基的制备。
六、实验报告
1、记录本实验配制培养基的名称、数量，并图解说明其配制过程，指明要点。
2、记录所做培养基的无菌检查结果。
七、实验思考题
1、为什么微生物实验室所用的三角瓶口或试管口都要塞上棉塞才能使用？能否用木塞或棉皮塞代替？
2、配制培养基时为什么要调节pH？
3、高压蒸汽灭菌为什么比干热灭菌要求温度低、时间短？
4、高压蒸汽灭菌的原理是什么？是否只要压力表上的指针指到所需的压力时就能达到所需灭菌温度？为什么？
5、培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌？假如不能与时灭菌应如何处理？已灭菌的培养基如何进展无菌检查?
6、请设计实验对饮料进展无菌检查。
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附录 高压蒸汽灭菌技术
一、目的要求
了解消毒和灭菌的原理，并掌握各种灭菌方法的操作步骤。
二、实验材料
上述配制的培养基，包扎的培养皿、试管，高压蒸汽灭菌锅，注射器，镊子，玻璃涂棒。
三、根本原理
在微生物实验中，需要进展纯培养，不能有任何杂菌污染，因此必须对所用器材、培养基和工作场所进展灭菌和消毒。灭菌是指杀死一定环境中的所有微生物，包括微生物的