胶体金检测技术.ppt

文档介绍：胶体金检测技术
第1页，本讲稿共26页
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主要内容
一、免疫胶体金技术的发展历史
二、胶体金检测卡的基本原理及构造
三、免疫胶体金层析法检测原理及应用
四、ß-激动检测原理（双抗体夹心)
（以HCG检测为例）
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免疫层析法检测原理（竞争抑制反应）
（以吗啡检测为例）
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免疫层析法检测的原理（应用proteinA金标）
（以HIV检测为例）
阴性
阳性
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克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇胶体金试纸条是胶体金层析法的应用
采用竞争抑制法，将氯金酸用还原法制成一定直径的金溶胶颗粒，标记为抗体。以硝酸纤维素膜为载体，样本中的盐酸克伦特罗在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素（NC）膜检测线上盐酸克伦特罗－BSA偶联物（与盐酸克伦特罗的化学结构相似）的结合，使检测线不显颜色，结果为阳性。反之，检测线显红色，结果为阴性。
规定尿液中盐酸克伦特罗的胶体金免疫层析测定方法。适用于猪、牛尿液中盐酸克伦特罗的筛选，最低检测浓度为3ng/ml。
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-------结果判定依据
阴性对照出现红色条带，阳性对照不出现红色条带，说明检测卡有效。
如阴性对照不出现红色条带，或阳性对照出现红色条带，出现任何一种现象或两种同时出现，说明检测卡失效。
待检尿样检测区出现红色条带为阴性
待检尿样检测区不出现红色条带为阳性
阳性结果
样品中可能含有等于或高于3ng/ml的盐酸克伦特罗。
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四、ß-激动剂检测卡快速筛查尿样的方法介绍
以盐酸克伦特罗胶体金快速检测卡为例
一．适用范围：
主要用于定性检测，测定动物尿液，如猪尿、牛尿、羊尿等样品中盐酸克伦特罗的残留。整个检测过程只需要5~10分钟左右，灵敏度为3 ng/ml(3ppb)。也就是说当尿液中盐酸克伦特罗的残留大于或等于3 ng/ml时，检测卡才能检测到。
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二 、包装
每个包装袋中包含盐酸克伦特罗免疫胶体金快速检测卡，滴管1个、干燥剂1片。
三、现场筛查步骤
1．在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将检测卡和待检样本溶液恢复至室温。
2．从原包装袋中取出检测卡，打开后请在一个小时内就地使用。
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3．将检测卡平放，用移液器或滴管吸取尿液样品溶液，垂直滴加3滴（约80ul）于加样孔中，加样后开始计时。
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4．结果应在5~10分钟读取，其他时间判读无效，根据示意图判定结果。
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A、阴性（-）：C、T线均出现。表示样品中不含有克伦特罗或其深度低于检测限。
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B、阳性（+）：检测T线不出现，则表示样品中克伦特罗浓度高于检测限。
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C、无效：未出现质控C线，表明操作过程不正确或检测卡已失效，重新使用新卡。
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经试剂卡检测的阳性样品在未进行确正之前，被称为疑似样品，必须进行确证后，才能准确判断，不能提前作结论。
因此，对于出现阳性结果的样品，应按官方抽样程序分瓶封装样品，并于0 ~-4℃保存，尽快送到我中心进行确证检测。
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五、常见问题及注意事项

，避免受潮，打开包装请尽快使用
试纸条中的NC膜受潮后，尿样在上面无法正常泳动，无法到达吸水纸的位置；胶金垫上的金标抗体受潮后会变性，从而失去原有的生理性功能，影响抗原抗体的选择性反应。因此，试纸条必须保持干燥，从包装袋中取出后要尽快使用。
，避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹
尿样一开始在NC膜上泳动时，是利用毛细管作用，如果风吹太阳晒，NC膜上的尿样蒸发后难以到达吸水纸的位置，会产生假阳性结果，因此，检测时要避免阳光直射和电风扇、空调的风直吹。
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这主要是人手掌的汗液中有钾、钠离子存在，影响NC膜上泳动时的毛细管作用。
，以免交叉污染 每一类检测卡的抗体都具有独特的特异性选择，但性质相同或结构相似的样品组成会产生干扰。
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