文档介绍：专题2 微生物的培养与应用
课题1 微生物的实验室培养
1
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培养基可以分为哪几类？
培养基一般都含有哪些营养物质，此外
还要满足哪些要求？
获得纯净培养物的关键是什么？
什么是消毒、灭菌，常用方法有哪些？
15min
3、化学药剂消毒法:用75%酒精进行皮肤消毒;***气消毒水源
4、紫外线
适用对象：操作空间、液体、双手等
19
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灭菌的方法：
1、灼烧灭菌
2、干热灭菌：160-170 ℃
下加热1-2h。
3、高压蒸汽灭菌：100kPa、
121 ℃下维持15-30min.
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请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿
（2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管
（3） 实验操作者的双手
思考
消毒
灭菌
灭菌
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练****思考并讨论下面的仪器分别用什么样的消毒和灭菌方法？
培养基
培养皿
空 气
接种环
双 手
牛 奶
②巴氏消毒
③化学消毒
⑤紫外线消毒
⑥高压蒸气灭菌
①灼烧灭菌
④干热灭菌
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单个
或少数菌体
：
大小、形状、光泽度、
颜色、透明度等。
：
：
三、菌落
鉴定菌种的重要依据
固体培养基上
大量繁殖
子细胞群体
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1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方
H2O 定容至1000ml
Nacl 5g
蛋白胨 10g
牛肉膏 5g
㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
：
培养基用量
依配方计算各成分的用量
：
：
牛肉膏黏稠，用称量纸称取
牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖
牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解
→取纸
→蛋白胨、NaCl
→琼脂
→补水定容
、分装、封口：
：
：
培养基、培养皿
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倒平板
约50℃
防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染
灼烧灭菌，
防止瓶口的微生物污染培养基
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，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？
问题讨论
答：用手触摸，刚不烫手。
？
答：灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
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，为什么要将平板倒置？
，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？
答：皿盖凝结水珠，防止水珠落入培养基，造成污染； 平板倒置，防止培养基表面的水分挥发。
答：最好不用，空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
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：
㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
㈡纯化大肠杆菌：
⑴平板划线法：
菌种
划3个平板
1个不划线
：
接种环
防止划破培养基
（重复实验）
（空白对照）
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问题2：每次划线前灼烧接种环的目的：
问题3：划线结束后灼烧接种环的目的：
避免接种环上可能存在的微生物污染培养基
杀死上次划线结束后残留的菌种
及时杀死接种环上残留的菌种，避免污染环境和操作者。
问题1：第一步灼烧接种环的目的：
问题讨论
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，为什么要等其冷却后再进行划线？
答：以免接种环温度太高，杀死菌种。
，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？
答：线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
30
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？
一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；
二是存留在划***的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划***生长，会形成一个条状的菌落。
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6支试管，分别加入9ml无菌水
1ml
101
1ml
102
1ml
103
1ml
104
1ml
105
1ml
106
⑵稀释涂布平板法：
：
菌液
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⑵稀释涂布平板法：
：
：
各梯度分别涂布3个平板
1个不涂布作空白对照
滴
灼
试
涂
稀释103倍
稀释104倍
稀释105