文档介绍：万方数据
蕊面面飅面丽面丽孑丽西丽丽面面面丽瓦面猫谲面面面蕊砑岖盯夏磊葫抢錾籆突变蛋白在原核细胞中的稳定表达二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二食品锛际跹П甑淼期臣噩嗣二二黝Ⅳ肌Ⅳ鰐王佩李盛陶，王宁，高晓冬。，鷈甜籆糖基转移酶性质开辟了新途径����。作者所在实验室前期在大肠杆菌中表达了酵母来源的重组蛋白以���5�物，��狹�为糖基供体，利用化学酶法快速高效的合成�����玫孜锖铣啥蕴逋獠舛ㄈ薃��突变蛋白活性提供了重要的依据【拈纠。作者尝试在���和酿酒酵母及大肠杆菌中表达人���籆�相关突变蛋白，并成功在大肠杆菌中大量表达。结合本实验室开发的体外重构�惶腔��揪吨卸噍拼脊烟乔疤宓姆椒ǎ�舛�����籓�相对活性。大肠杆菌表达菌株������捅泶镌靥錺�一��柿＃汗河诘鹿鶱���公司；人基因组文库：购于美国�����公司；质粒���、��猦�：酿酒酵母���⑷颂迮咛ド�细胞���：均为作者所在实验室保存，见表��引物合成及基因测序：由华大基因公司完成。培苯基大肠杆菌��一��使用�液体或固体培养基培养：大肠杆菌表达菌株使用�培养基培养；酿酒酵母使用��和�—��嘌��人胚胎肾细胞���在含有�％胎牛血清的����信嘌����酆厦浮����用浮�×����跋�制性内切酶：购白大连宝生物工程公司；��狿��蛋白质凝胶制备试剂盒：购自碧云天生物；�����陨ḿ粒汗喊撞��中国公司；�����：购自北京全式金生物公司；��—������—��汗�自西格玛奥德里奇�虾�贸易有限公司；����胶回收试剂盒、�����锎炕�约梁小����柱式质粒��⌒统樘崾约梁校汗鹤陨�ど�锕�程公司；��—��嘌��吞ヅＱG���：购自����荆黄渌�约粒壕�9��蚪�诜治龃渴约痢�半干电转仪：购自伯乐中国公司：三重四极杆液质连用仪：购自美国赛默飞世尔科技公司；液相色谱柱粒径��汕��．�购自美国沃特世公司；���������显像仪：购自美国通用电气公司。在��数据库中下载人类���幕�蛐蛄小Ｒ�朊盖形坏鉞��蚟，�所有���阃槐湟�锔�軦���公司��������在线设计。以���籉�和���籖�见表�为引物，以人基因组文库中包含�闓�基因的单克隆质粒为模板扩增，产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定。用���锘厥帐约梁谢厥�目的片段，经����盖校�靥逵孟嗤��体系进行双酶切，回收后的片段与载体用�������印Ｗ;疿��籊��惺芴�赴��坎加贚�固体培养平皿上���斗∥�的��，�℃培养过夜，挑取单菌落进行菌落��八�盖械缬就计�鉴定，并测序验证。�羯字视°岱ㄈ≈票傅牡鞍字嗜芤��稬，�罶�蛋白质上样缓冲液，混匀后于��嬷����Ｅ渲���痙�姆掷虢汉��痙�的浓缩胶。取��蛋白质样品上样，电压����笞N���０敫煞ㄗDず螅�％脱脂牛奶封闭��灰豢笰��狥����，室温孵育��欢�笹����△�、��籄��虯��材料�又趾椭柿��������一．��，�瓻���海�褐茫��������Ⅱ王、癸仪器方法表达载体�饭菇���加入�¨��鱐��表�狙芯克�帽泶锵低澈虯��一��槐湮坏���矗“��，伽��甕��，�甉����—������、���．��×��表�狙芯克�玫囊���狥�た�△垦￡�������������。����狢����鏸删�，�：�甃��琾．