文档介绍：: .

实验材料和试剂
（一）实验材料
大肠杆菌 DH-5
质粒 pUC118（ampicillin，AmpR）
（二）培养基和试剂
1. LB 液体培养基(%)
胰蛋白胨（Tryptone）
酵母浸出粉（Yeast extract）
NaCl
pH ～（用 2mol/L NaOH 调节）
（分装：20ml/250ml 三角瓶，每组 2 瓶。3ml/试管，每组 2 管。
高压灭菌 30 分钟）。
2. LB 固体培养基
LB 液体培养基加入 %的琼脂粉即可专心做生物。
（分装：50ml/250ml 三角瓶-，加入克琼脂粉，每组 1 瓶。高
压灭菌 30 分钟）。
3. 抗生素：氨苄青霉素（ampicillin,，Amp），配制成 100mg/ml 备用。
4. C生物秀aCl2 溶液www .
(配制方法：称取克无水 CaCl2，溶于 90ml 蒸馏水中，定容至 100ml，
装于 250ml 三角瓶中，高压灭菌 30 分钟，4℃保存。）
（三）器材
接种针 10ml 移液管
50ml 塑料离心管 5ml 移液管
90mm 培养皿 1ml 移液管
Eppendorf 管 200 l 吸头
三角爬 15×150 试管
生物秀论坛 -学术交流、资源共享与互助社区3 -专心做生物
冰块试管铝帽
牛皮纸纱布盖
线绳硫酸纸
（四）仪器
净化工作台摇床机
恒温水浴锅离心机
培养箱

实验步骤
以下均需无菌操作
（一）感受态细胞的制备
1. 大肠杆菌 DH-5 冷冻保存的菌种，挑取一环，划线接种在 LB 固体培
养基平板上（活化菌种），37℃培养过夜（约 16 小时）。
2. 从长好的平板上挑取一个单菌专心做生物落，转接在含有 3ml LB 液体培养基的试管
中，37℃振荡培养过夜（约 16 小时-）。
3. 取菌液接种于 20ml LB 液体培养基的 250ml 三角瓶中，37℃振荡
培养 2～3 小时，待 O