文档介绍：专题5
DNA和蛋白质技术
课题1
DNA的粗提取和鉴定
讨论2：如何证明他们是遗传物质？
讨论3：怎样才能将细胞内的这些物质别离出来？
讨论1：构成生物体的遗传物质是什么？
1、提取生物大分子的根本思路
选用一定的物专题5
DNA和蛋白质技术
课题1
DNA的粗提取和鉴定
讨论2：如何证明他们是遗传物质？
讨论3：怎样才能将细胞内的这些物质别离出来？
讨论1：构成生物体的遗传物质是什么？
1、提取生物大分子的根本思路
选用一定的物理或化学方法别离具有不同物理或化学性质的生物大分子
2、生物大分子
主要指蛋白质、酶和核酸
3、提取DNA的根本思路
利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分
根底知识
提取DNA的方法
4、DNA的溶解性
DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反
①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？
mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低； mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。
②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？
当***化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0．14 mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出
6、DNA在酒精溶液中的溶解性
DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些物质那么可以溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步别离
7、DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性
①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响
②大多数蛋白质不能忍受60－80°C的高温，而DNA在80°C以上才会变性
③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜，去除脂质和蛋白质,但对DNA没有影响
8、DNA的鉴定
① DNA与二苯***〔沸水浴〕会染成蓝色，因此，二苯***可以作为鉴定DNA的试剂
②***绿〔蓝绿色〕
〔一〕实验材料的选取
1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。〔从中选取2～3种实验材料〕
2、原那么：但凡含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大
实验设计
〔二〕破碎细胞，获取含DNA的滤液
1、动物细胞
动物细胞的破碎较易，例如，在鸡血细胞液中参加一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可
答：蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分可以大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，再加上搅拌的机械作用，就加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出DNA
讨论：为什么参加蒸馏水能使鸡血细胞破裂？
2、植物细胞
①植物细胞需要先用一定的洗涤剂和食盐溶解细胞膜
讨论：参加洗涤剂和食盐的作用分别是什么？
答：洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于DNA的释放；食盐的主要成分是NaCl，有利于DNA的溶解
②实例：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液
讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？
答：研磨不充分会使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯***鉴定不显示蓝色等
〔三〕去除滤液中的杂质
为了纯化提取的DNA需要将滤液作进一步处理
讨论：此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？
答：可能含有核蛋白、多糖和RNA等杂质
答：用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质
为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质
?
答：方案二是利用蛋白酶分解杂质蛋白，从而使提取的DNA与蛋白质分开；方案三利用的是DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，从而使蛋白质变性，与DNA别离
讨论：方案二与方案三的原理有什么不同
?
〔四〕 DNA的析出与鉴定
1、DNA的析出
DNA的析出用的是与滤液体积相等的冷却的酒精溶液〔体积分数为95 ％〕，静置2－3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水
2、 DNA的鉴定
鉴定DNA时在试管中先参加物质的量的浓度