文档介绍:试验八 细胞融合-----
小鼠骨髓瘤SP2/0细胞与小鼠脾细胞融合
实验八细胞融合小鼠骨髓瘤SP细胞与小鼠脾细胞融合专家讲座
第1页
一、试验目标
了解细胞融合原理
掌握细胞融合基本方法
试验八 细胞融合-----
小鼠骨髓瘤SP2/0细胞与小鼠脾细胞融合
实验八细胞融合小鼠骨髓瘤SP细胞与小鼠脾细胞融合专家讲座
第1页
一、试验目标
了解细胞融合原理
掌握细胞融合基本方法
实验八细胞融合小鼠骨髓瘤SP细胞与小鼠脾细胞融合专家讲座
第2页
细胞融合概念
二、试验原理
实验八细胞融合小鼠骨髓瘤SP细胞与小鼠脾细胞融合专家讲座
第3页
病毒诱导融合
聚乙二醇诱导融合
电场诱导融合
激光诱导融合
惯用诱导融合伎俩有哪些?
二、试验原理
细胞融合概念
实验八细胞融合小鼠骨髓瘤SP细胞与小鼠脾细胞融合专家讲座
第4页
实验八细胞融合小鼠骨髓瘤SP细胞与小鼠脾细胞融合专家讲座
第5页
三、仪器、材料与试剂
仪器:
离心机、 CO2培养箱、超净台、 37℃恒温水浴锅、显微镜、血球计数板、解剖器械、烧杯、载玻片、盖玻片、离心管。
材料:
SP2/0细胞、昆明小鼠
试剂:
Hanks液、45%PEG ,75%乙醇
实验八细胞融合小鼠骨髓瘤SP细胞与小鼠脾细胞融合专家讲座
第6页
四、实 验步骤
(1)小鼠摘眼球放血(可不做), 拉颈 处死,浸泡在75%酒精内,3~5min
(2)无菌取脾脏, Hanks液洗一次,脾脏剪碎,培养液洗 一次,过不锈钢筛网,转移至10mL离心管
(3)800g 离心10分钟,取沉淀细胞用Hanks液洗2次(每次加入5mL溶液,轻轻混匀800g 离心10分钟)
实验八细胞融合小鼠骨髓瘤SP细胞与小鼠脾细胞融合专家讲座
第7页
(4)细胞计数,待用。
(5)取对数生长骨髓瘤细胞, 800g 离心10分钟,取沉淀细胞用Hanks液洗2次(每次加入5mL Hanks液,轻轻混匀800g 离心10分钟)
(6)细胞计数,待用。
(7)将骨髓瘤细胞(105-6)与脾细胞(106-7)按1: