层粘连蛋白对吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡的影响.pdf

文档介绍：口三暑日冰一、摘要中文论著摘要??????????????????????????.1 英文论著摘要??????????????????????????.3 二、英文缩略语???????????????????????????。6 三、论文前言???????????????????????????????????????7 刖舌????????????????????????????????????????·7 材料与方法???????????????????????????.9 实验结果????????????????????????????14 讨{仑???????????????????????????????????????..1 6 结{仑???????????????????????????????????????..1 7 四、本研究创新性的自我评价?????????????????????l 8 五、参考文献????????????????????????????1 9 六、附录综j盔???????????????????????????????????????..22 在学期间科研成绩????????????????????????33 致谢?????????????????????????????????..??????34 个人简介????????????????????????????35 ·中文论著摘要· 层粘连蛋白对吉西他滨诱导胰腺癌细胞凋亡的影响研究背景胰腺癌是一种恶性度极高的消化系统肿瘤,在世界范围内,其病死率排在所有恶性肿瘤中的第8位,每年约造成227,000的患者死亡。90%的胰腺癌患者在诊断后一年内死亡,诊断后中位生存时间仅约为3—6个月。外科手术切除是治疗胰腺癌的有效方法,然而在明确诊断后,因为肿瘤的局部侵袭和远处转移等多因素影响,仅有约15%的患者适宜手术切除,且其5年生存率<5%。改善胰腺癌患者的预后,更多的期望寄托在其术后辅助治疗中,但是胰腺癌对几乎所有种类的化疗药物均不敏感,导致胰腺癌预后不良。即便是作为临床一线用药的吉西他滨(gemcitabine,Gem),其化疗反应率仅有28%左右,而且现有临床试验验证联合化疗用药效果亦不理想。随着分子生物学进展,人们认识到除了肿瘤细胞本身的特性,肿瘤细胞的微环境对于肿瘤细胞的命运有着重要的影响。细胞外基质(extracellular matrix,ECM)是肿瘤微环境的主要成分之一, 包括层粘连蛋白(1aminin,LN)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、I型胶原、 IV型胶原等。上皮细胞依赖于适当的细胞与ECM蛋白间相互作用,以维持其生存。一|已有多项研究表明,在多种肿瘤细胞中,肿瘤微环境相关信号通路对于肿瘤细胞的生物学行为或抵御化疗药物诱导的凋亡等起到重要的作用,如ECM/整合素信号在乳腺癌、小细胞肺癌、神经胶质瘤、骨髓瘤等肿瘤细胞中对抗放化疗起了重要的作用。而且ECM/整合素也能够在多种肿瘤细胞的免疫逃逸中起着重要作用。 LN作为ECM的主要成分之一,已被证实能够有效诱导肝癌、乳腺癌等肿瘤细胞对化疗产生耐药性,但在胰腺癌中,尚未有明确报道。有研究证实,结合LN的整合素亚单位在胰腺癌细胞系及组织中高表达,并且与胰腺癌患者的不良预后正相关。LN在胰腺癌的特殊化疗耐受中究竟扮演什么样的角色?本研究拟通过研究层黏连蛋白(1aminin,LN)刘。胰腺癌细胞对吉西他滨敏感性的影响,初步探讨肿瘤微环境在胰腺癌化疗耐受中的作用。目的确定一个适合的药物浓度处理胰腺癌细胞系,然后将层粘连蛋白处理因素引入研究。通过对比层黏连蛋白处理前后的胰腺癌细胞对化疗药物敏感性的变化, 研究层粘连蛋白对化疗药物诱导胰腺癌细胞凋亡的影响。材料与方法选择人胰腺癌细胞系Capan一2、MiaPaCa~2和Pane一1,MTT法检测Gem诱导各胰腺癌细胞凋亡的能力(半数致死量,1C50值),继而用各细胞系的IC50值浓度的吉西他滨处理细胞,并将层粘连蛋白处理因素引入研究。Annexin V-FiTC检测 LN对吉西他滨诱导的各胰腺癌细胞系早期凋亡的影响,进一步western blot检测LN作用前后的细胞中的活化caspase一3蛋白的表达水平变化,研究LN对吉西他滨诱导细胞凋亡能力的影响。结果 Gem作用48h后,三株人胰腺癌细胞株相比较,MiaPaCa一2对Gem最敏感,IC50 ,Capan一2次之,IC50为lOug/ml,而Pane一1最不敏感, IC50>500ug/ml。之后用LN处理三株细胞,Gem作用48h后,MiaPaCa一2的IC50 , ug/ml,差距具有