文档介绍：实验五微生物的大小和数量的测定
第1页，本讲稿共14页
一、实验目的与要求：
学****使用血球记数板测定微生物数量的方法。
学****使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微镜下测定微生物大小的方法。
第2页，本讲稿共14页
二、实验原实验五微生物的大小和数量的测定
第1页，本讲稿共14页
一、实验目的与要求：
学****使用血球记数板测定微生物数量的方法。
学****使用目镜测微尺和镜台测微尺在显微镜下测定微生物大小的方法。
第2页，本讲稿共14页
二、实验原理---血球计数板对酵母菌培养液计数：
血球计数板的构造
﹟
﹟
第3页，本讲稿共14页
细胞数/ml=[每中方格平均细胞数×25（16）/10-4]
×稀释倍数
第4页，本讲稿共14页
二、实验原理---酵母菌大小测定
测量工具及构造
镜台测微尺
目镜测微尺
第5页，本讲稿共14页
目镜测微尺的校正
第6页，本讲稿共14页
三、实验器材
显微镜
血球计数板、镜台测微尺、目镜测微尺
酵母菌悬液（测数用）、酵母菌装片（测定大小用）
长颈胶头吸管、盖玻片、擦镜纸等。
第7页，本讲稿共14页
四、实验步骤---酵母菌悬液计数
1、取清洁无油的血球计数板，检查计数室，找出计数室的中方格与小方格；
2、在计数室上面加盖玻片，取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡；
3、静止5min后，用低倍镜观察并将计数室移至视野中央；
4、在高倍镜下计数：按要求计数五个中方格的菌数总值，然后求得每个中格的平均值。乘上25（或16）就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每mL菌液中的含菌数。
第8页，本讲稿共14页
5、压在方格线上的菌体，以压在底线和右侧线上的菌体计入本格内；遇到有芽体的酵母时，若芽体和母体同等大，就按单个酵母计数。
6、计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。
四、实验步骤---酵母菌悬液计数
（X1+X2+X3+X4+X5）
5
× 25（或16） × 10 × 1000 ×稀释倍数
酵母菌细胞数/mL=
第9页，本讲稿共14页
四、实验步骤---酵母菌大小的测定
1、目镜测微尺的校正：在高倍镜下，看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合
2、仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两刻度间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。镜台测微尺的刻度每格长10µm，所以：目镜测微尺每格长度（ µm）=（镜台测微尺格数×10）/目镜测微尺格数
第10页，本讲稿共14页
3、菌体大小的测定：取下镜台测微尺，将酵母菌染色标本置于载物台上，然后在高倍镜下用目镜测微尺测量菌体的大小。
第11页，本讲稿共14页
将显微计数结果记录于下表中。T表示五个中方格中的总菌数；D表示菌液稀释倍数。
各中方格中菌数
T
D
二室平均值
个/ml
1
2
3
4
5
第一室
第二室
五、实验结果
第12页，本讲稿共14页
目镜测微尺标定结果：40×镜下倍目镜测微尺每格长度是 μm。
菌号
酵母的直径大小测定结果
目镜测微尺格数
实际直径/µm
1
2
3
4
5
均值
第13页，本讲稿共14页
六、问题与讨论
为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来校正？
在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺点？
绘制观察到的酵母菌生物图。
第14页，本讲稿共14页