文档介绍：一、微生物接种技术
一）、试验目标
学****微生物接种工具使用，掌握无菌操作方法，建立有菌概念。
二）、试验原理
无菌技术：指在微生物试验工作中，控制或预防各类微生物污染及其干扰一系列操作方法和相关办法。
接种：将微生物接到适于一、微生物接种技术
一）、试验目标
学****微生物接种工具使用，掌握无菌操作方法，建立有菌概念。
二）、试验原理
无菌技术：指在微生物试验工作中，控制或预防各类微生物污染及其干扰一系列操作方法和相关办法。
接种：将微生物接到适于它生长繁殖人工培养基上或活生物体内过程。
实验五无菌操作及接种技术专家讲座
第1页
三）试验用具
实验五无菌操作及接种技术专家讲座
第2页
四）试验步骤：
1、接种工具介绍
接种环、接种钩、接种针、接种圈、接种锄、玻璃涂棒、其它接种工具
实验五无菌操作及接种技术专家讲座
第3页
2、超净工作台
超净工作台是为试验室工作提供无菌操作环境设施，以保护试验免受外部环境影响，同时为外部环境提供一些程度保护以防污染并保护操作者。
原理：超净工作台洁净环境是在特定空间内，洁净空气(进滤空气)按设定方向流动而形成。以气流方向来分，现有超净工作台可分为垂直式，由内向外式以及侧向式。
实验五无菌操作及接种技术专家讲座
第4页
垂直流超净工作台
水平流超净工作台
垂直流超净工作台
实验五无菌操作及接种技术专家讲座
第5页
超净台使用与维护
-
使用前打开紫外灯照射40~60min
开启超净工作台工作电源，关闭紫外灯，并用75%%过氧乙酸喷洒擦拭消毒工作台面。
使用中，有机玻璃罩受到污染，禁止用酒精棉球擦拭，请用含水棉布檫拭；
请保持超净台整齐、干燥，不要堆积杂物；
使用完成，关闭煤气开关或酒精灯；
使用完成后，用消毒液擦拭工作台面，关闭工作电源，重新开启紫外灯照射15min.
定时做无菌试验，以测定净化台是否符合无菌要求。
实验五无菌操作及接种技术专家讲座
第6页
2、无菌操作关键点
1）、要求建立“有菌概念”。
2）、接种时要有一个洁净环境，整个操作过程必须在火焰旁进行。
3）接种环，棉塞一定要拿在手上，不能随便乱丢。
3、微生物接种技术
1）、斜面接种技术
从斜面菌种将菌移接至另一斜面培养基方法，叫做斜面接种。
实验五无菌操作及接种技术专家讲座
第7页
接种方法：
A、接种前用酒精棉球擦净桌面；
B、将试管贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等，然后用酒精棉球擦手消毒；
C、点燃酒精灯以后，在火焰旁将每一支试管内棉塞稍微转一下，使其松动，方便在接种时易拔出，并将试管放在试管架上，放在接种台右前方；
实验五无菌操作及接种技术专家讲座
第8页
D、将菌种和斜面培养基两支试管，用大拇指和其它四指握在左手中，使中指位于两试管之间部分，斜向上，并使他们呈水平位置，也可将试管横放在左手掌中央，用四个手指托住试管，大拇指压在试管上，斜面向上；
E、右手拿接种环，在火焰上将环部分烧红灭菌，环以上凡在接种可能进入试管内部分，均应经过火焰灼烧。（见图4）
实验五无菌操作及接种技术专家讲座
第9页
图4 接种环灭菌
实验五无菌操作及接种技术专家讲座
第10页
以下操作，需要使管口靠近火旁
F、用右手小指、无名指和手掌拔掉棉塞；
G、以火焰灼烧管口，灼烧时应不停转动试管口，使试管口沾染少许菌得以烧死；
H、将烧过接种环伸入菌种试管内，先将环接触没有长菌培养基部分，使其冷却，以免烧死被接种菌体，然后轻轻接触菌体，取出少许，慢慢将接种环抽出试管（图5），注意尽可能不要使环部分碰钉子到管壁，取出后不可使环经过火焰；
实验五无菌操作及接种技术专家讲座
第11页
图5 从一个试管移种到另一试管
实验五无菌操作及接种技术专家讲座
第12页
I、快速将接种环在火焰旁伸进另一试管，在斜面培养基上从底部划线到顶部，但不要把培养基划破，也不要使菌种沾染管壁；
J、取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将棉塞塞上，不要用试管去迎棉塞，以免试管在运到时灌入不洁空气，
K、将接种环在火焰上再灼烧灭菌，放回原出后，再腾出手来将棉塞塞紧，将新接种斜面试管放在试管架上；
L、接种后斜面培养基，放在恒温箱内培养。
实验五无菌操作及接种技术专家讲座
第13页
斜面接种示意图
实验五无菌操作及接种技术专家讲座
第14页
A、加热融化培养基
将三角瓶瓶口包扎绳解开，轻轻旋动棉塞，然后将瓶子放入微波炉中加热，选取高火力，加热1min后取出晃动，重复加