文档介绍：紫外分光光度法原理
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绿、蓝、青、紫等组成的光谱，称为发射光谱。如果在白炽灯光与棱镜之间放一个有色溶液的玻璃皿，则通过棱镜后的光谱上会出现一处或几处暗带，这种带有暗带的光谱称为该有色溶液的吸收光谱，吸收
大多数情况下，比色分析都提供了使用光的波长（一般是最大吸收峰波长）。如果没有提供使用波长的话，可以用紫外分光光度计从200～1000nm范围内扫描吸收光谱，搜索到吸收峰，再用吸收峰波长来比色分析。
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咖啡因样品用紫外光谱定性和定量，上：标准品；下：样品
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（二）吸光系数：郎伯-比尔定律中的K称为吸光系数。因比色杯的直径用cm为单位，因此K的单位决定于浓度c用什么单位，如c以mol/L为单位时K称为摩尔吸光系数，用Emol或εmol表示；如果物质的分子量未知，浓度可用%为单位，K称为百分吸光系数，用E%表示。
E的定义是：某波长光通过1cm杯、1mol/L或1%浓度的某溶液时，该溶液对该波长光的吸光度。E在特定波长、1mol/L或1%浓度、特定溶剂条件下是该物质的一个特征常数，反映该物质的吸光能力，资料和测定时都要标明其特征
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波长或最大吸收波长，表示为Emol~nm,max,1cm或E%~nm，max，1cm。许多物质的吸光系数在书或资料中可以查到，如药典规定VB12应该有278±1 nm、361±1nm、550±2nm 3个吸收峰，其E1%361nm，1cm=207。实际工作中，1mol/L的浓度太高，可以配成1mmol/L或1μmol/L的浓度，相应地写成Emmol（μmol）~nm，max，1cm。根据吸光系数的特性
，它有3项用途：
：被测物质的光谱特性和标准物如果一致，可粗略定性。如检查VB12注射液是否变质，测定其光谱，结果为279
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±0、±0、±，完全一致，可以判定该物质为VB12（未变质）。
一些苯衍生物的紫外光谱特征如下 ：
化合物 溶剂 吸收峰 吸收峰 吸收峰 Emolmax，1cm
苯 碳氢化合物254nm 250 204 8800
甲苯 碳氢化合物262 260 208 7900
六***苯
碳氢化合物 271 230 221 10000
***苯 碳氢化合物 267 200 210 7400
苯酚 碳氢化合物 271 1260 213 6200 .
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：紫外光谱法检查纯度是一种简便有效的方法，用于许多化合物检测。如阿司匹林在空气中容易吸收水分产生水杨酸，阿司匹林在280nm处有强吸收峰，而水杨酸的吸收峰迁移到312nm，只要检测在312nm处是否有吸收峰，即可判断有无水杨酸。再如无水乙醇精制过程中要用苯，测定无水乙醇中是否残留苯
，测定其吸收光谱，乙醇在210 ~600nm之间无吸收峰，而苯在250、254 nm有吸收峰，以纯无水乙醇为参比，对样品进行光谱分析，如果在250、254nm处出现吸收峰，则说明有苯残留。
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（纯度）:如药典规定VB12的E1%max，361nm，1cm=207，%，求实际浓度，方法：药液用重蒸水精确稀释20倍，水做参比，，其含量为：1%∶207=x%∶ ，x%=%，浓度= %×20=%
:一般的比色分析中都有标准品，未知样品都是通过和标准溶液对比分析含量。某些情况下，没有标准品，可以用摩尔吸光系数或百分吸光系数进行测定，直接测定溶液的吸光度，通过和该纯物质的吸
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光系数比较，可以计算出浓度。这样的分析需要经过精确校正了波长的分光光度计，紫外分光光度计的波长一般精确到2nm，可以承担这样的分析。如果知道分子量的话，百分吸光系数和摩尔吸光系数之间可以互相换算，换算公式是：百分吸光系数=10×摩尔吸光系数÷物质的分子量。
比如血红蛋白是4个亚基组成的蛋白质，。每个亚基都在高铁***化钾[K3Fe(CN)6]和***化钾[KCN]溶液