文档介绍：流式细胞仪操作规程目录
1：淋巴细胞亚群测定及绝对计数
2：活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的检测
3：HLA-B27测定
4：CD55／CD59测定
5：干细胞检测和绝对计数
6：白血病免疫分型测定
7：淋巴细胞T细胞亚群细肿瘤、免疫缺陷、病毒感染，自身免疫性疾病、创伤、急性感染、多脏器功能衰竭、器官移植等具有临床诊断、病情判断、治疗等价值。
临床常用Th／Ts比值来判断病人的免疫状况。
Th／Ts比值升高：表示免疫功能亢进：见于自身免疫性疾病，如SLE、类风湿性关节炎、自身免疫性溶血性贫血、重症肌无力以及HBsAg+乙肝等。
Th／Ts比值减低：表示免疫功能下降：艾滋病、病毒感染、肿瘤病人、慢活肝和活动性肝硬化、再生障碍性贫血、粒细胞减少患者。
2：NK细胞主要破坏各种肿瘤细胞和感染*些病毒、细菌的细胞，所以在抗肿瘤和防御疾病中起主要作用。NK活性减低主要见于各种恶性肿瘤、自身免疫性疾病、病毒感染、应用免疫抑制剂，疲劳综合征病人等，NK活性随年龄增长而减退。NK细胞也参与第二型超敏反响和移植物抗宿反响，白介素-2治疗后；外周血NK
细胞增加。
方案〔Protocol〕
点击
点击
4色
3色
点击
〔命名，点击save〕
结果
此图为CD45圈门
如果做绝对计数，则
填写Flow-Count的浓度
选中cell/ul即可
活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的测定
方法
流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特)
原理：
双/三色直接免疫荧光法。荧光素标记的各种单克隆抗体参加到全血中，与白细胞膜上相应的抗原结合，经过溶血、洗涤〔和固定〕等步骤后，在流式细胞仪上进展分析，从而得到相应各亚群的百分数。活化淋巴细胞外表抗原为CD3+/CD25+和CD3+/HLA-DR+。CD3+/CD45RO+是记忆型T细胞。CD3+/CD45RA+是纯真型T细胞。
标本采集与处理
受检者的准备 检查对象生活饮食处于日常状态。
采集部位 静脉采血
抗凝剂 EDTA或肝素抗凝血
要求1．样本量1ml。
2．样本应在采集后6小时处理，冷冻或溶血的标本不能用。
3．-×109/L之间。假设>×109/L， 样本需要稀释，用PBS稀释；假设<×109/L，应别离单个核细胞。
试剂
品牌 剂型规格贮存
贝克曼库尔特
成分 1：单克隆抗体 液体2—8℃
(CD3/HLA- CD25-PC5
CD3--
CD45RO-PE CD4- 〕
2：全血溶血试剂(Q-Prep) 液体()
A：甲酸 液体 70ML 室温
B：碳酸钠等 液体 32ML 室温
C：多聚甲醛 液体 14ML 室温
(Optilyse C ) 液体 室温
3：鞘液() 液体 20L 室温
4：清洗液() 液体 5L 室温
5：荧光微球() 液体 10ML 2-8℃(Flow-Check)
仪器
BeckmanCoulter EPICS*L/FC500/Altra
样本制备：
1)按照要求，分别向已编好号的试管中参加10/20 ul单克隆抗体和同型对照
2)分别向试管中参加混匀的100u1抗凝血。
3)混匀，避光，室温孵育20-30分钟
4)溶血：a. OptiLyse C(按说明书步骤溶血)
b. 使用COULTERQ—PREP制备系统
开机---显示READY灯亮---选择35SEC灯亮---开门---放入试管关门---自动进展溶血---显示READY灯亮---开门---取出试管---再进展下一个样品测定。
〔*溶血前确认A/B/C管路充满并能打出液体〕
5)上机测样〔可根据样本情况选择洗或不洗上样〕
报告结果
报告百分数
操作性能
精细度批五次重复CV<2％
参考值(百分数)
CD3+/HLA-DR+ ±%CD3+/CD2