文档介绍：word
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流式细胞仪操作规程目录
1：淋巴细胞亚群测定与绝对计数
2：活化淋巴细胞亚群、记忆T与纯真T的检测
3：HLA-B27测定
4：CD55／CD59测定
5：干细胞检测和绝对计数
6：白血病免疫分型测定
7：淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4测定
8：细胞周期分析
9：活化血小板检测
10：血小板抗体测定
11：红细胞抗体测定
12：粒细胞抗体测定
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淋巴细胞亚群测定
(流式细胞仪)
医院检验科
操作规程文件号：
200年月日起实施
第1版
(共3页)
本规程每2年复审一次
复审日期：年月日
复审人：
规程编写者：
审 批 者：
批准日期：年月日
文件分发部门和／或个人
院档案室保管者：
检验科 主任：
检验科实验室：
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淋巴细胞亚群测定
方法
流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特)
原理：
双/三色/四色直接免疫荧光法。荧光素标记的各种单克隆抗体参加到全血中，与白细胞膜上相应的抗原结合，经过溶血、洗涤〔和固定〕等步骤后，在流式细胞仪上进展分析，从而得到淋巴细胞亚群的百分数，参加Flow-Count即可得出绝对计数。淋巴细胞外表抗原分布如下：T淋巴细胞：CD3+；B淋巴细胞：CD3-，CDl9+；辅助性T淋巴细胞：CD3+CD4+；抑制性T淋巴细胞：CD3+CD8+；NK细胞：CD3-CDl6+56+等。根据淋巴细胞膜上CD分子表达的不同，流式细胞仪可以分辨出淋巴细胞与其各种不同的亚群，利用计算机软件计算出淋巴细胞亚群的百分数，参加Flow-Count组会自动得出绝对计数。
标本采集与处理
受检者的准备检查对象生活饮食处于日常状态。
采集部位静脉采血
抗凝剂 EDTA或肝素抗凝血
要求1．样本量1ml。
2．样本应在采集后6小时内处理，冷冻或溶血的标本不能用。
3．-×109/L之间。假如>×109/L，样本需要稀释，用PBS稀释；假如<×109/L，应别离单个核细胞。
试剂
品牌剂型规格贮存
贝克曼库尔特
成分 1：单克隆抗体液体2—8℃
(CD45/4/8/3 CD45/56/19/3
CD4/8/3 同型对照IgG1/IgG1/IgG1
CD3/19 M1293 CD3/16+56 CD19-PC5 643
Flow-)
2：全血溶血试剂(Q-Prep) 液体()
A：甲酸液体 70ML 室温
B：碳酸钠等液体 32ML 室温
C：多聚甲醛液体 14ML 室温
(Optilyse C ) 液体室温
3：鞘液() 液体 20L 室温
4：清洗液() 液体 5L 室温
5：荧光微球() 液体 10ML 2-8℃(Flow-Check)
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仪器
BeckmanCoulter EPICSXL/FC500/Altra
样本制备：
1)按照要求，分别向已编好号的试管中参加10/20 ul单克隆抗体和同型对照
2)分别向试管中参加混匀的100u1抗凝血。
3)混匀，避光，室温孵育20-30分钟
4)溶血：a. OptiLyse C(按说明书步骤溶血)
b. 使用COULTERQ—PREP制备系统
开机---显示READY灯亮---选择35SEC灯亮---开门---放入试管关门---自动进展溶血---显示READY灯亮---开门---取出试管---再进展下一个样品测定。
〔*溶血前确认A/B/C管路充满并能打出液体〕
5)上机测样〔可根据样本情况选择洗或不洗上样〕
6)需要做绝对计数的指标，在相应管中参加与血样等量的Flow-Count(务必做到三同：同枪，同人，同种方法加Flow-Count，而且加完即上机)
报告结果
报告百分数〔和绝对值〕
操作性能
精细度批内五次重复CV<2％
参考值(百分数〔绝对值〕)
CD3+-%(1141-1880) CD4+ -%(