文档介绍：1 / 2
对于石蜡切片：
1、烤片:60C60分钟
2、脱蜡：二甲苯中I脱蜡15分钟一二甲苯II脱蜡15分钟一无水乙醇I5分钟一无水乙醇H5分钟-90%J亨I5分钟-90叱醇H5分钟一70%醇5分钟一蒸储水5分钟一蒸储水5分钟。1 / 2
对于石蜡切片：
1、烤片:60C60分钟
2、脱蜡：二甲苯中I脱蜡15分钟一二甲苯II脱蜡15分钟一无水乙醇I5分钟一无水乙醇H5分钟-90%J亨I5分钟-90叱醇H5分钟一70%醇5分钟一蒸储水5分钟一蒸储水5分钟。
3、抗原修复：高压修复，事先烧开锅中的水，
酸钠,pH6。0（柠檬酸三钠3g,）,上
汽后加热10分钟，，放入装有自来水的瓷缸中缓慢冷却至室温?：玻片取出放入湿盒，加3%H2O22（2mlH2O22加入18ml蒸储水中，现配现用，避光），室温孵育10分钟，PBS洗3次，每次5分钟。（也可不用去除内源性酶）.
。封闭（Blocking）
加10叱常驴血清（原液100ul+900u1PBS1ml够用30张片子）,室温孵育封闭30分钟。如果背景较高，可以4c封闭过夜。不用洗，用滤纸吸干周边水分。从封闭开始所有的步骤，一定要注意样品的保湿，避免样品的
干燥，否则极易产生较高的背景。
.一抗孵育（Primaryantibodyincubation）
参考一抗的说明书，按照适当比例用免疫染色一抗稀释液（10%］羊血清PBS或1%BSA-PB）稀释一抗。？立即加入稀释好的一抗，4c过夜，
第二天取出复温45分钟。PBSSfc3次，每次5分钟。？（Secondaryantibodyinucubation）
按照适当比例用免疫荧光染色二抗稀释液稀释荧光标记的二抗，立即加入稀释好的二抗，室温或4c在侧摆摇床上缓慢摇动孵育一小时.
PBS洗涤3次。，可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
.蛋白检测（Dete