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DB62
甘肃省地方标准
DB 62/ XXXXX—XXXX
陇南市天麻萌发菌、蜜环菌培养技术规程
容器和单位，也称一级种、试管种。
原种
由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以菌种瓶或聚丙烯塑料袋为容器，也称二级种。
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栽培种
由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。常以塑料袋为容器。栽培种只能用于栽培，不可再次扩大繁殖菌种。
萌发菌、蜜环菌的培养
培养条件
萌发菌、蜜环菌的培养必须在无菌条件下进展，需要有接种室、接种箱或超净工作台、接种工具；菌种培养室、恒温培养箱、菌种培养架；高压蒸气灭菌锅、电热枯燥箱，紫外灭菌灯；菌种保藏用电冰箱；化学药品，试管、天平等。
菌种和基质质量标准应符合NY5099的规定和要求。
使用水源符合GB 5749的要求。
菌种培养
萌发菌、蜜环菌一级菌种〔母种〕培养
PDA培养基制备
PDA培养基：去皮马铃薯200 g、葡萄糖20 g、琼脂20 g、蒸馏水1000 ml、pH 5～6。
配制方法：将马铃薯切片，加水煮沸30 min，用纱布过滤，取滤液1000 ml并放入琼脂加热，使之全部融化，最后参加葡萄糖，溶解后调节pH为5～6。然后将培养基趁热分装于试管内，经高压灭菌〔 kg/cm2〕30 min。取出后按25°斜度放置冷却后接种。
消毒灭菌：接种室灭菌每立方米用40%的甲醛溶液8 ml，高锰酸钾5 g进展熏蒸。先关闭窗户，取甲醛溶液装入容器中，再放入高锰酸钾，人随之离开接种室，关闭房门，熏蒸1 h即可。熏蒸后应隔1 d使用。
菌种选择
使用正规菌种厂生产的优良品种；或采收天麻种子发芽后的原球茎、兰科植物中的根部、诱导培养萌发菌子实体。用以上材料别离培养菌种。
别离方法
组织别离
萌发菌别离：将天麻种子萌发的原球茎用自来水冲洗干净，然后用无菌水冲洗数次，置于灭过菌的小培养皿中，％***化***溶液浸泡消毒1～2 min，用灭菌小剪刀剪成2～3段，在金霉素液中蘸一下，即可接人PDA平面培养基中，置于25 ℃恒温箱内培养，3～10 d即可发出菌丝。
蜜环菌别离：将蜜环菌索或天麻块茎，或天麻原球茎，或兰科植物的根分别用水洗净外表泥土，然后切取需要的部份组织，用无菌水冲洗3次，%***化***溶液浸泡1 min；再用无菌水冲洗3次，洗去残存的药液，置于无菌培养皿内。或将菌索等材料分别剪成1 cm长的小段或小块，在青霉素液〔20 μg/ ml〕中浸片刻，用灭菌滤纸吸去外表附着水液，然后接种于斜面培养基上，置25 ℃恒温培养，3～7天左右，开场分别长出白色菌丝和菌索。别离子实体时，用无菌水冲洗消毒残存药液后，用灭菌滤纸吸净水珠，再用解剖刀从菌盖中纵向剖开子实体， cm的一块组织置于PDA培养基上培养。
孢子别离
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将开伞的子实体截去菌柄的下半部，用70%的酒精在菌盖外表及菌柄局部进展揩擦消毒，然后菌褶向下插在孢子收集装置的支架上。将支架放于无菌培养皿中，用钟罩或大烧杯罩住以收集孢子。