文档介绍：蚕豆微核实验
方便面调料对蚕豆根尖细胞的遗传毒性研究
姓名,周敏 同组者,白霞、闫媛媛、郭凯红、胡雅琦、孔丽娜
,生物系 生物科学102班 学号2010131234 指导老师:郝雪
峰,
运用蚕豆根尖细胞微核技术,以微核千分oring and evaluation of both simple and relatively reliable. 关键词 蚕豆 微核实验 豫竹方便面调料 核变异
引言 微核,Nicronucleus,MCN,是真核生物细胞中的一种异常结构,它是由于细胞受
到损伤后,由细胞分裂过程中丧失着丝粒的染色体断片或落后染色体产生的。这些断片或染
色体在分裂过程中行动滞后,在分裂末期不能进入主核,便形成了主核之外的核块。蚕豆根
尖细胞微核技术已发展的相当成熟,具有较高的灵敏性和可能性,作为检测化学品遗传毒性
[1-2]的方法,得到了广泛应用。而且在测定监测淡水污染物和检测化学诱变剂的研究已列入
国家生物监测技术规范,水环境部分,,并推广应用于大气、废水、土壤等的致突变活性检
[3]测 。
但目前关于检测食物的诱变活性报道较少。方便面作为一种速食小吃早已被人们接受,但其调料中的一些成分会在食用过程中渗透到血液中,导致人体细胞的染色体畸变。此外,含调料的废水排出后,会造成水环境方面的污染。因此,本文以蚕豆根尖作为实验材料,来探讨调料的遗传毒性,旨在为其存在的隐患提供一个参考依据。
1、材料与用品
实验材料:蚕豆
实验器材和试剂
显微镜、试管、蚕豆培养盆、纱布、毛巾、三角瓶、载玻片、盖玻片、 溶有豫竹方便面调料的水、卡诺氏固定液(用乙醇和冰醋酸以3:1(v/v)混合配制)、 盐酸(1mol/L);Giemsa染液
2、实验方法
浸种
按实验需要选取大小均匀、饱满的蚕豆种子30粒，直接放入盛水的塑料盆中，在常温下浸泡1天，期间要注意换水。
催芽
待种子吸胀后，用潮湿的纱布松散包裹置于盆中，纱布上载盖一层湿水的毛巾，催芽约1—2天。
处理根尖
选取初生根生长良好的种子，放入盛有被测液的纱布中，进行根尖处理。另一些继续清水培养(作为对照组)。
根尖细胞恢复培养
处理后的种子用自来水浸洗，洗净后再置入潮湿纱布中，再恢复培养一天左右。
取材、制片
固定
将恢复后的种子，从根尖顶端切下1cm长的幼根，用甲醇:冰醋酸(3:1)液固定24小时。
解离
用蒸馏水浸洗固定好的幼根，吸净蒸馏水，加入6mol/L盐酸将幼根浸没，室温下酸解10分钟，幼根软化即可。
染色
吸去盐酸，用蒸馏水浸洗幼根三次，每次1,2分钟。滴加染液，染色20,30分钟，截下1,2mm左右长的根尖，加盖玻片，压片观察。
3、结果记录及处理
首先在显微镜低倍镜下找到分散均匀的分生区组织细胞，分裂相较多的部位，再转至高倍镜下进行观察。微核识别的标准:?微核大小在主核1/3以下，并与主核分离;?小核的着色与主核一致或稍浅;?小核形态呈圆形、椭圆形或不规则型。每一处理观察3个根尖，每个根尖数1000个细胞，统计其中含微核的细胞数，然后平均，即为该处理的MCN%，即微核千分率，以其作为指