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蛋白酶的盐析沉淀实验报告
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蛋白酶的盐析沉淀实验报告
班级：生工1005 学号： 姓名：朱同辉
实验目的：
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实验原理：
盐析法
在蛋白质溶液中加入少量中性盐，蛋白质溶解度增加，称为盐溶；而加入大量中性盐达一定浓度，蛋白质就会沉淀，称为盐析。
原理 ： ①大量盐加入后，能与蛋白质争夺水分子，去除水膜；
②大量盐能中和蛋白质分子表面电荷，使分子间静电斥力减弱，疏水作用增强，使蛋白质沉淀。
盐析效果： 二价离子 > 一价离子
离子半径小 > 离子半径大
阳离子∶Mg2+>Ca2+>Ba2+>NH4+>Na+>K+>Pb+>Cs+
阴离子∶PO43->SO42->Cl->Br->NO3->I->SCN-
蛋白质的溶解度与盐离子强度间的关系可以用Cohn经验式来表示：
式中：S—蛋白质的溶解度
I—离子强度
β—常数，与温度和pH有关
Ks—盐析常数，与蛋白质和盐的种类有关
其中I 根据下式计算：
式中：ci—i 离子的浓度（mol/L）
zi—i 离子所带的电荷
蛋白酶活力的测定
福林（Folin）试剂在碱性条件下可被酪氨酸还原成兰色化合物，蛋白酶水解酪蛋白产生酪氨酸，将产物中未被水解的酪蛋白除去后与福林试剂作用，根据显兰色的深浅可以计算出酪氨酸的产生量，从而推断酶活力的大小。
蛋白酶液的稀释、酶活测定和计算
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K—（μg），
N—酶液稀释倍数
4—酶反应液为4 ml，取出1 ml测定，故乘以4
10—反应时间为10 min
参考稀释倍数：原酶、饱和度20%，30%，40%，50%，60%，70%的上清液分别为1000，200，150，100，100，100，50倍
实验步骤：
1）蛋白质盐析
分两个大组进行实验，每大组取6只烧杯编号，分别加入50 ml蛋白酶液，，，，，（对应20%，30%，40%，50%，60%，70%饱和度），在磁力搅拌器不断搅拌下，将其缓慢加入酶液中，加完后再搅拌5 min，使硫酸铵完全溶解。