文档介绍：液相色谱柱的选择与使用液相色谱柱的选择与使用目录?一、液相色谱柱的选择?1、分离模式的选择?2、C-18柱的性能影响因素?3、保留值与pH的关系?二、液相色谱柱的安装?1 、液相色谱柱的结构?2、色谱柱的安装?三、液相色谱柱的使用?1 、样品的前处理?2 、流动相的配制?3、色谱柱的平衡?4、流动相流速的选择?四、分析条件调整的影响?五、液相色谱柱的维护色谱柱在高效液相色谱仪中的作用和峰形产生原理色谱柱高压泵检测器色谱工作站进样器液相色谱仪由高压液体泵、检测器及液相色谱柱等三部分组成,其中液相色谱柱的正确安装和使用,是液相色谱工作的关键;也是液相色谱工作者获得正确可靠的实验数据的必经之路。一、液相色谱柱的选择?1、分离模式的选择样品溶于有机溶剂溶于水溶于四氢呋喃非离子化离子化溶于有机溶剂溶于水溶于正己烷溶于甲醇或甲醇/水或乙***或乙***/水用硅胶的正相模式用键合相的正相模式用键合相的反相模式用键合相的反相模式低分子凝胶渗透色谱用键合相的反相模式抑制电离反相键合相色谱离子对键合相的反相模式用硅胶的正相模式离子交换模式凝胶渗透色谱凝胶过滤色谱大孔填料的离子交换模式用大孔填料的反相模式分子量>2, 000分子量<2, 000正相&反相色谱?正相色谱20%反相色谱80%正相吸附色谱极性:固定相> 流动相固定相- 极性流动相(己烷, 庚烷)- 非极性极性物质后出峰反相分配色谱极性:固定相< 流动相固定相-非极性流动相(甲, 乙醇, 乙***, THF, 二***乙烷)-极性非极性物质后出峰柱填料基质?硅胶基质- pH 3~8? Al2O3. nH2O - pH1~14?聚合物基质- pH1~14高或低pH下, 硅胶会溶解化学修饰困难孔结构复杂, 孔径不均匀,导致柱效不够高, 有机溶剂可能导致聚合物基质溶涨而受损2、C-18柱的性能影响因素:物理性质?硅胶纯度?色谱柱尺寸?颗粒形状?粒径?表面积?孔径?键合类型?碳覆盖率?封端化学性质C-18柱的性能影响因素:色谱柱物理性质硅胶纯度?填料硅胶的纯度与残留金属离子浓度色谱柱尺寸?填料床的长度和内径颗粒形状?球型或不规则型粒径?平均颗粒直径, 通常3-10μm表面积?颗粒外表面和内部孔表面的总和, 以m2/gram表示孔径?颗粒的孔或腔的平均尺寸, 范围80-300?C-18柱的性能影响因素:硅胶纯度(以安捷伦柱为例)二氧化硅N aKM gAlCaTiFeZrCuCrZnZorbax Rx-SIL10< SIL17ndnd579322188< 1nd88N ucleosil56N /AN /And1305776ndN /AN /AndHypersil2900N /A403003865230N /AN /AN /AN /And = 未检出金属浓度(ppm )A类硅胶Original ZORBAX SIL (1970s)由于带负电荷的残留硅羟基和酸性表面上金属含量高(硅羟基的pKa低), 导致碱性化合物发生拖尾B类硅胶(高纯)ZORBAX Rx-Sil (1987)由于金属含量低, 硅羟基pKa高, 碱性化合物不发生拖尾Zorbax Rx-SIL: 11种金属< 35 ppm (未检出其他杂质, <1ppm); % 纯度的二氧化硅