文档介绍::是应用细胞生物学和分子生物学方法,借助工程学的实验方法或技术,在细胞水平上研究改造生物遗传特性和生物学特性,以获得特定的细胞、细胞产品或新生物体的有关理论和技术方法。广义:包括所有的生物组织、器官及细胞离体操作和培养技术。狭义:指细胞融合,细胞分裂素是完成体细胞胚发育的基本前提,其使用浓度一般低于生长素的使用浓度。
〔2〕培养基及培养条件的影响:需一定浓度的复原态氮(含低浓度的NH4Cl,才能形成体细胞胚,但只在诱导阶段,愈伤组织期间影响不明显)。培养基中的氮源会显著影响离体条件下的胚胎发生,研究说明,NH4+的作用关键在诱导培养阶段。加入水解酪蛋白、活性炭等附加成分,或改善气体交换利于体细胞胚胎的发生。
〔3〕基因型对胚形成能力的影响:体细胞胚形成受基因控制,形成数量也受基因调控。同类植物不同基因型,在体细胞诱导难易、形成时间以及单个外植体产生体细胞胚的数量上存在明显差异。
11. 体细胞胚发生过程中的特异蛋白质变化。
胚性愈伤组织的水溶性蛋白和盐溶性蛋白高于非胚性愈伤组织,而醇溶性蛋白低于非胚性愈伤组织。这些特异性的蛋白可作为标记蛋白,用于鉴定愈伤组织或胚性细胞。
体细胞胚发生的基因表达调控不仅涉及胚胎发育本身的相关基因的有序表达,同时涉及对培养条件作出反应的相关基因表达。已鉴定的基因表达时序分析,有三类基因:一、涉及胚性细胞转变,体细胞胚的早期形态建立的基因
二、体细胞胚发生发育的整个过程始终表达的基因,有的甚至持续到植株再生
三、与体细胞胚发育过程有关的基因
第二章 离体培养下的遗传与异
:由于离体培养条件下并没有发生雌雄配子受精,因此,把由任何形式的细胞培养所产生的植株称为体细胞无性系。
:是指同一有机体中同时存在有遗传组成不同的细胞,它是组织培养中常见的现象。
:植物体细胞在离体条件下,以及在离体培养之前,会发生各种遗传和不遗传的变异,把遗传的变异称为无性系变异。
:非遗传变异的一种情况,其不涉及基因结构的变化,而只是在基因表达水平上的变异,它是细胞内原有遗传潜力在离体培养中诱导的表达结果,如最常见的生长素自养型变异。
:非遗传变异的另一种情况是生理适应性变异,与后遗传变异不同,它们通常是在某种外界条件存在时才表现出变异。在这种外界条件不存在时,变异也随之消失。最典型的是培养基中硝酸盐的存在所引起的培养物硝酸复原酶活性增强,而硝酸盐不存在时,硝酸复原酶活性又恢复正常水平。
?
1〕供体植物:供体植株原有的倍性水平在培养细胞多倍化过程中起着重要作用,单倍体组织的二倍化现象比二倍体组织的四倍化现象明显。而且,体细胞变异与供体植物的遗传基础有关。不同生理状态的组织细胞的变异有很大差异 。
2〕培养基及培养方式:激素浓度及不同激素配比对染色体倍性变化有影响,不同的激素浓度可以有选择地诱导不同倍性的细胞的分裂。培养基的物理状态以及培养类型也会引起细胞的变异,一般来讲,悬浮培养细胞比半固体培养容易产生变异。原生质体培养变异大于细胞培养,细胞培养变异大于组织器官培养,性细胞变异大于体细胞。
3〕继代培养次数:继代次数越多,细胞非整倍体变异的频率越高
。
愈伤组织的变异比再