文档介绍：实验四实验四沉淀反应沉淀反应双向扩散与免疫火箭电泳双向扩散与免疫火箭电泳11实验课重点实验课重点掌握:掌握::熟悉:、双向扩散实验33原理:将抗原抗体分别加在琼脂糖不同的对应孔中,两者在凝胶中自由扩散,在比例合适处形成白色沉淀线。技术要点:平板玻璃上倾注一层均匀的琼脂糖薄层,凝固后打孔,孔径为3mm,孔间距在3~5 mm之间,在相对的孔中加入10ul血清与抗血清,放置湿盒37℃18~24h 后,观察孔周围是否出现沉淀环。鉴定抗原抗体的最基本、最常见的方法之一双向扩散试验(平板法):人血清抗原::抗人抗体:(生理盐水(11::2~12~1::6464系列倍比稀释)系列倍比稀释)%%**,锥形瓶,打孔用小吸管移液器和水浴箱,锥形瓶,(平板法),倒板是要迅速且厚度掌琼脂要充分加热,倒板是要迅速且厚度掌握在握在1~~(视线要在平皿侧面观察)。(视线要在平皿侧面观察)。,垂直打孔。打孔时要等琼脂完全冷却后,垂直打孔。。用针挑去孔内琼脂时要小心损伤孔边缘。,不得使加样头碰到琼脂孔内加样要准确,不得使加样头碰到琼脂孔边缘。孔边缘。。平皿要始终水平操作。、、AbAb浓度及分子量相近;浓度及分子量相近;B. AgB. Ag、、AbAb浓度相近,分子量浓度相近,分子量Ag<Ab;Ag<Ab;C. AgC. Ag、、AbAb浓度相近,分子量浓度相近,分子量Ag>Ab;>Ab;>Ab,Ag>Ab,分子量相近分子量相近;;>Ab,Ag>Ab,分子量分子量Ag<Ab;<Ab;<Ab,Ag<Ab,分子量分子量Ag>AbAg>Ab99电泳时凝胶中抗体不移动,样品孔中的抗原向正极泳动,随着抗原量的逐渐减少,抗原泳动的基底区越来越窄,抗原抗体分子复合物形成的沉淀线逐渐变窄,形成一个形状如火箭的不溶性复合物沉淀峰,抗体浓度固定时,峰的高度与抗原量呈正相关。原理单向免疫扩散+电泳,定量检测技术实验二、火箭免疫电泳1010