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蚂蟥生长繁殖习性及其遗传多样性分子标记研究.pdf

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文档介绍:南京农业大学博士学位论文蚂蟥生长繁殖研究姓名:刘飞申请学位级别:博士专业:动物营养与饲料科学指导教师:郭巧生;王恬20080601摘要蚂蟥生长繁殖研究摘要药材水蛭为蚂蟥WhitmaniapigraWhJtman、水蛭HirudonipponicaWlfltman和柳叶蚂蟥IThitmaniaacranulataWhitman的干燥品,,并已成为人类死亡的第一杀手,而以水蛭为主要原料的中成药产品有望成为这一顽症的克星,,且随着社会发展及其相关产品的开发,其需求量仍将快速增长,,,为此蚂蟥种质资源亟待整理和评价,、皮肤表皮细胞类型的分布等形态学研究开始,进一步研究了蚂蟥的生理、生长、繁殖习性和药材中农残、重金属的积累,并对不同炮制品、、生长、繁殖习性研究的基础上,收集了我国蚂蟥分布区部分种质资源,同时引入4个水蛭厦nipponica种群作为参照,在分子水平分析了蚂蟥遗传多样性,了解其群体遗传结构和多态性水平,并进行了类群的划分,,采用两种方法开发了蚂蟥的微卫星序列,并分析了其特点,:(1)应用组织石蜡切片和显捌摄影方法,对蚂蟥内脏器官,、食管、嗉囊、肠、直肠、侧盲囊、精巢、储精囊、榆精管、射精球、前列腺、,生殖系统器官和皮肤的组织结构和作用,、繁殖习性和人工养殖及种质鉴别提供参考依据.(2)应用呼吸室法研究了蚂蟥的耗氧率、,15—35"—·"1之间,—·"1之间,—~,20"~,~·"1,—·L一。说明蚂蟥的耗氧率随温度的升高而上升,窒息点随温度的升高而降低,体重与耗氧率呈负相关,与耗氧量呈正相关,白昼和夜晚耗氧率的差异不大.(3)研究了在不同温度条件下不同体重蚂蟥生长摄食情况,—25"C,其饱食量随着体重增大和温度的升高而增加,摄食率随个体增大而降低,在24h之内蚂蟥有两个摄食高峰.(4)在不同温度、体重条件下观察了蚂蟥产卵和孵化习性。结果表明,蚂蟥产卵和孵化的最适温度为25℃,产卵的最佳体重为209左右;温度能影响蚂蟥产卵前后的体重,而体重大小对产卵前后体重变化影响不明显;~,。(5)采用原子吸收分光光度计、原子荧光分光光度计和气相色谱仪对蚂蟥、,蚂蟥药材、养殖基地土壤和养殖用水六六六、,将类似蚂蟥类等动物的安全限量单独列出.(6)采用《药典》一部(2005版)的方法测定了野生和人工养殖蚂蟥不同炮制品的水分、醇溶性浸出物、总灰分,酸不溶性灰分、抗凝血酶活性等指标,用电感耦合等离子体发射光谱仪测定了铁、锌、铜、铬、铅、镉、汞等元素,,水分:人工养殖与野生炮制品两者之间差异不显著(P>D.∞);总灰分:滑石粉烫炮制品最高,与其它炮制品差异显著(户<):酸不溶性灰分:滑石粉烫炮制品最高,与其他炮制品差异不显著(P>n盯);醇溶性浸出物:野生炮制品与人工养殖炮制品差异显著(尸<n05);抗凝血酶活性:野生和人工养殖生晒品均达到药典标准,且二者之间差异不显著(P>口酊);人工养殖及野生蚂蟥不同炮制品中除铅超标外,其余金属元素含量均符合国家标准。(7)参考《药典》一部(

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