文档介绍：关于高效液相色谱仪的使用
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一、概述
色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年提出。分离出胡萝卜素、叶绿素和叶黄素。因一战爆发并未重视。
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色谱柱
固谱峰
保留时间（分）
基线
↓
峰高
峰宽
响应值
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基本术语
色谱图(chromatogram)——样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号-时间曲线。
基线(base line)——在正常操作条件下，仅由流动相所产生的响应信号的曲线。
噪音(noise)——基线信号的波动。通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。
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漂移(drift)——基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。
色谱峰(peak)——组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线。流出曲线上的突起部分。正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线。不对称色谱峰有两种：前延峰和拖尾峰。前者少见，可能是柱子出问题。
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保留时间(retention time，tR)——组分从进样到出现峰最大值所需的时间。
理论塔板数(theoretical plate number，N)
——用于定量表示色谱柱的分离效率（简称柱效）。
当色谱柱长度一定时，塔板数 N越大，被测组分在柱内被分配的次数越多，柱效能越高，所得色谱峰越窄。
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峰高(peak height，h)—峰的最高点至峰底的距离。
峰面积(peak area，A)—峰与峰底之间的面积,又称响应值。
精密度—日间、日内精密度
准确度—加标回收率
值为（加标样的量－样品量）×100%
标品的量
标准曲线
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定性定量分析及色谱图
标准品-
标准物质确定物质保留时间定性
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色谱法定性定量分析
，可以进行定性分析。
, 可以进行定量分析。
（1）确定实验条件（流动相、流速、检测波长等）。
（2）溶液的配制：流动相、标准品和待测样品。
（3）精密度和准确度实验。
（4）标准曲线测定。
（5）样品测定。
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色谱分析用水
（1）专门的超纯水机,得到Milli-Q水；
（2） 去离子水重蒸；
（3） 二次或三次重蒸水；
（4） 采用类似家用的纯水机；
（5） 市场上瓶装的纯净水或蒸馏水。
不管采用何种途径，配制流动相应用新鲜水。
，，除去有机物、无机离子及空气等。
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HPLC系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。有的仪器还有梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、预柱或保护柱、柱温箱等。
目前常见的HPLC仪生产厂家国外有Waters公司、Agilent公司、岛津公司等，国内有大连依利特公司、上海分析仪器厂、北京普析分析仪器厂等。
四、仪器组成
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数据分析系统
输液系统
进样系统
分离系统
检测系统
HPLC的系统组成
数据处理系统
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岛津公司LC-20
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Agilent 公司 1200 LC
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为什么要用高压输液系统？
由于高效液相色谱所用固定相颗粒极细，因此对流动相阻力很大，为使流动相较快流动，必须配备有高压输液系统。
它是高效液相色谱仪最重要的部件，泵的性能好坏直接影响到整个系统的质量和分析结果的可靠性。
一元、二元、四元泵。
HPLC有等强度(isocratic)和梯度(gradient)洗脱两种方式。
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输液泵的主要性能
①流速稳定：如1ml/min,其RSD应＜%，这对定性定量的准确性至关重要；
②流速量范围宽：~10 ml/min范围内连续可调，制备型应能达到100 ml/min；
③输出压力高：一般应能达到25MPa 或400巴;
④密封性能好，耐腐蚀。
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泵的保养
使用流动相尽量要清洁，尽量带进避免颗粒物质，造成泵内堵塞；
进液处的砂芯过滤头要经常清洗；
流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓