文档介绍：广东药学院
硕士学位论文
微生物酶法生产茶氨酸的研究
姓名:傅锦坚
申请学位级别:硕士
专业:病原生物学
指导教师:胡立勇
20090501
广东药学院硕士研究生学位论文
微生物酶法生产茶氨酸的研究
专业:病原生物学
研究生:傅锦坚
导师:胡立勇
中文摘要
茶氨酸是茶叶中的特征氨基酸,也是茶叶的呈味物质之一。它是一种具有
多种生理效应的特殊氨基酸,在食品添加剂方面已有广泛应用,在功能食品方面
崭露头角,在医药方面有待开发,市场潜力巨大。已报道的茶氨酸制备方法中,
微生物转化法是一种发展前景较好的茶氨酸制备方法。开展茶氨酸的微生物酶法
合成研究具有重要的理论意义和实践价值。本研究的主要目的是选择地衣芽孢杆
菌作为合成茶氨酸的产酶菌株,并结合种间耦联再生技术系统用于酶法合成
茶氨酸等进行研究,为利用微生物发酵法工业化生产茶氨酸打下基础。主要研究
结果如下:
产酶菌种:本实验采用γ谷氨酰基转肽酶工业生产菌株地衣芽孢杆菌
()为生成茶氨酸的产酶菌种。产酶发酵研究表明,此
菌株经产酶发酵后的γ谷氨酰转肽酶活性可达。
茶氨酸转化试验结果:地衣芽孢杆菌的γ谷氨酰基转肽酶具有较好的催
化谷氨酰***和盐酸乙***合成茶氨酸的能力。酶法合成茶氨酸的产量为。
谷氨酰***转化生成茶氨酸的转化率达。
产酶促进剂研究结果:在常规产酶发酵研究基础上,研究了一些产酶促
进剂对产酶发酵和茶氨酸转化的影响。正交试验结果显示,在产酶发酵培养基中
添加磷酸吡哆醛、金属离子、和表面活性剂可有效地提高地衣
芽孢杆菌的产酶能力。γ谷氨酰基转肽酶的活性可达,酶法合成茶氨
酸的产量为。谷氨酰***转化生成茶氨酸的转化率达。
种间耦联再生技术研究结果:本研究将地衣芽孢杆菌的产酶系统和嗜
热脂肪芽孢杆菌供能系统相耦联建立了一种种间藕联再生技术生产茶氨
酸。采用该技术进行茶氨酸转化生产,茶氨酸产量达到,谷氨酰***转化为
茶氨酸的转化率为。
I
广东药学院硕士研究生学位论文
固定化细胞技术生产茶氨酸研究结果:高活性的γ谷氨酰基转肽酶产
酶菌株地衣芽孢杆菌经产酶发酵后,用卡拉胶于℃包埋,制备成γ谷氨酰
基转肽酶固定化细胞。将固定化细胞产γ谷氨酰基转肽酶系统与供能系统
耦联后,在催化底物转化生成茶氨酸的同时实现被消耗的再生,使茶氨酸合
成反应高效率地进行。种间耦联固定化细胞合成茶氨酸的产量为,谷氨
酰***转化生成茶氨酸的转化率为。
本实验所选用的地衣芽孢杆菌为γ谷氨酰基转肽酶的工业化生产菌株,具
有较高的酶活性,该酶用于茶氨酸转化生产具有实用价值。本实验研究所建立的
种间耦联再生技术方法,不仅可用于茶氨酸的生产,还可以为其它酶工程发
酵产品的生产提供技术支持。本实验还采用了固定化细胞技术生产茶氨酸,该技
术的应用有利于工业化生产的操作和提高茶氨酸产品质量。本实验的所有研究为
工业化生产茶氨酸提供了一条有价值的技术路线。
关键词:地衣芽孢杆菌;γ谷氨酰基转肽酶;茶氨酸;酶法; 再生技
术
II
广东药学院硕士研究生学位论文
Study on production of theanine by microbal
enzymatic method
Graduate: jin-jian Fu
Speciality: Pathogen Biology
Supervisor: professor li-yong Hu
[ABSTRACT]
Theanine is the most important free amino acid in its graceful
taste,theanine has many favorable physiological suggest that demand
for theanine will e great as a supplement for improving and maintaining human
several methods for preparing theanine have been reported,they are
plicated and show unsatisfactory microbial enzymatic method to
produce theanine is getting more and more this study,a sor