文档介绍：〈61〉非无菌制剂的微生物限度检查法:微生物计数法
引言
本检查法可用于需氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。
本检查法主要用于确定原料或制剂是否符合相应的微生物限度标准。当用于此项检查时,按下述规定进行检验,包括样品的取样量MPN法
阴性对照试验
为了确认试验条件是否符合要求，应以稀释剂替代公事业进行阴性对照试验，阴性对照应无菌生长。供试品检查时也需进行阴性对照，如果阴性对照有菌生产，则需要调查整个试验过程。
培养基的促生长试验
每批培养基、由脱水培养基或按处方配制的培养基均应进行培养基促生长试验。
接种如表1所示的少量微生物（≤100cfu）至胰蛋白大豆肉汤管或胰蛋白大豆琼脂平板培养基，每一批培养基分别制备1管或1皿；接种如表1所示的少量微生物（≤100cfu）至沙氏葡萄糖琼脂平板培养基，每一批培养基分别制备1皿，按表1 所列条件培养。
对于固体培养基，被测试培养基获得的菌落数与参比培养基标准接种获得的菌落数差异因子不得大于2（从被测试培养基获得的菌落数不得大于或小于来自验证过的标准培养基菌落数的2倍），并且其新鲜培养物的菌落形态应于之前验证过的标准培养基管出现清晰可见微生物的时间和形态一致。对于液体培养基，被测试培养基管出现清晰可见微生物的时间和形态应与之前验证过的标准培养基管一致。
供试品计数方法的适用性确认试验
供试液制备
根据供试品的理化特性选择供试液的制备方法，若下列制备方法经确认均不适宜，应采用适宜的替代方法。
水溶性产品 取规定量，***化钠-蛋白胨缓冲液、，一般制成1：10供试液。如果需要，调节供试液pH值至6~8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步稀释。
水不溶性非油脂类产品 取规定量，***化钠-蛋白胨缓冲液、：10的混悬液。引湿性较差的供试品，可在稀释剂中加入表面活性剂助悬，如1g/L的聚山梨酯80。如果需要，调节供试液pH值至6~8。必要时，用同一稀释液将供试液进一步稀释。
油脂类产品取规定量，溶解于经过滤除菌的无菌十四烷酸异丙酯中，或与最少量并能使供试品乳化的无菌聚山梨酯80或其他无抑菌性表面活性剂充分混合，必要时可采用不超过40℃的热的稀释剂，特殊情况下最多不超过45℃，若需要乳化可在水浴中进行，然后加入预热的稀释剂使成1：10供试液，保持温度，小心混合，并在最短时间内形成乳液状。必要时，用含适宜浓度的无菌聚山梨酯80或其他非抑制性无菌表面活性剂的稀释剂进一步10倍系列稀释。
液体或固体的气雾剂 取规定量容器数，从每一供试品容器中取全量或一定剂量的样品无菌转移至薄膜过滤器或无菌容器中进一步取样检查。
贴剂取规定数量贴剂，去除贴剂保护层（释放内衬），将具有黏性的一面朝上置无菌玻璃板或塑料垫上。用适宜的无菌多孔材料（如无菌纱布）覆盖在黏性面上，防止贴剂相互粘连，然后将其置于适宜体积并含有灭活剂（如聚山梨酯80 或卵磷脂）的稀释剂中，剧烈振摇至少30分钟。
接种和稀释
在上述制备的供试液和对照组（不含试验材料）中，接入含不超过100cfu的试验菌悬液，所加的菌悬液的体积应不得超过供试液体积的1%。
为验证样品中的微生物