文档介绍：兰州理工大学
现代生物仪器分析实验指导书
(四年制生物工程、食品科学与工程专业)
王永刚编写
生命科学与工程学院
二零一二年十月

目录
实验一、紫外吸收光谱法同时测定Vc和VE 3
实验二气相色谱法测定酒或酊中C2H5OH含量 5
实验三高效液相色谱法测定维生素B1含量 7
实验四原子吸收分光光度法测定金属元素含量 10
实验一、紫外吸收光谱法同时测定Vc和VE
一、实验目的
1. 掌握Cary 50紫外可见分光光度计的使用;
2. 学会用解联立方程组的方法,定量测定吸收曲线相互重叠的二元混合物。
二、方法原理
维生素C(抗坏血酸)和维生素E( 生育酚)起抗氧剂作用,即它们在一定时间内能防止油酯变酪。两者结合在一起比单独使用的效果更佳,因为它们在抗氧剂性能方面是“协同的”。因此,它们作为一种有用的组合试剂用于各种食品中。抗坏血酸是水溶性的, 生育酚是酯溶性的,但它们都能溶于无水乙醇,因此,能用在同一溶液中测定双组分的原理来测定它们。
根据朗伯—比尔定律,用紫外—可见分光光度法很容易定量测定在此光谱区内有吸收的单一成分。由两种组分组成的混合物中,若彼此都不影响另一种物质的光吸收性质,可根据相互间光谱重叠的程度,采用相对应的方法来进行定量测定。如:当两组分吸收峰部分重叠时,选择适当的波长,仍可按测定单一组分的方法处理;当两组分吸收峰大部分重叠时,则宜采用解联立方程组或双波长法等方法进行测定。
解联立方程组的方法是以朗伯—比尔定律及吸光度的加合性为基础,同时测定吸收光谱曲线相互重叠的二元组分的一种方法。从图中可以看出,混合组分在λ1的吸收A组分和B组分分别在λ1的吸光度之和Aλ1A+B,即
Aλ1A+B=κλ1AbcA+κλ1BbcB
同理,混合组分在λ2的吸光度之和Aλ2A+B应为
Aλ2A+B=κλ2AbcA+κλ2BbcB
若首先用A,B组分的标样,分别测得A,B两组分在λ1和λ2处的摩尔吸收系数κλ1A,κλ2A和κλ1B,κλ2B,当测得未知试样在λ1和λ2的吸光度Aλ1和Aλ2后,解下列二元一次方程组:
Aλ1 =κλ1AbcA+κλ1BbcB
Aλ2 =κλ2AbcA+κλ2BbcB
即可求得A,B两组分各自的浓度cA和cB。
一般来说,为了提高检测的灵敏度,λ1和λ2宜分别选择在A,B两组分最大吸收峰处或其附近。
三、仪器和试剂
仪器: Cary 50紫外可见分光光度计:美国瓦里安中国有限公司;
石英比色皿2只;50mL容量瓶9只,;10mL吸量管2只。
试剂:抗坏血酸:称3mg抗坏血酸,溶于无水乙醇中,并用无水乙醇定容于100mL;
生育酚:称8mg 生育酚溶于无水乙醇中,并用无水乙醇定容于100mL
四、实验步骤
1. 配制标准溶液
(1)、、、,用无水乙醇稀释至刻度,摇匀。
(2)、、、,用无水乙醇稀释至刻度,摇匀。
2. 绘制吸收光谱
以无水乙醇为参比,在320~220nm范围测绘出抗坏血酸和
生育酚的吸收光谱,并确定和。
3. 绘制标准曲线
以无水乙醇为参比,在波长和,分别测定步骤1配制的8个标准溶液的吸光度。
4. 未知液的测定
,用无水乙醇稀释至刻度,摇匀。在和分别测其吸光度。
五、数据处理
1. 绘制抗坏血酸和生育酚的吸收光谱,确定和。
2. 分别绘制抗坏血酸和生育酚在和时的4条标准曲线,求出4条直线的斜率,即、、和。
3. 计算未知液中抗坏血酸和生育酚的浓度。
六、问题讨论
1. 今有吸收光谱曲线相互重叠的三元体系混合物,能否用解联立方程组的方法测定它们各自的含量?
。
七、实验报告要求
Vc、VE紫外扫描图,四条标准工作曲线(要求编辑成WORD文档打印,并作标注)
结果计算报告
实验二气相色谱法测定酒或酊中C2H5OH含量
一、目的要求
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二、实验原理
内标法是一种准确而应用广泛的定量分析方法,操作条件和进样量不必严格控制,限制条件较少。当样品中组分不能全部流出色谱柱,某些组分在检测器上无信号或只需测定样品中的个别组分时,可采用内标法。
内标法就是将准确称量的纯物质作为内标物,加入到准确称取的样品中,根据内标物的质量m 。与样品的质量m 及相应的峰面积A 求出待测组分的含量。
待测组分质量mi与内标物质