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定药物浓度的方法计算剩余的药量。酚红不被小肠吸收,因此向供试液中加入定量的酚红,在一定间隔时间测定酚红的浓度,就可以计算出不同时间供试液的体积,再根据测定的药物浓度,就可以得出不同时间小肠中剩余的药量或被吸收的药量。
三、实验仪器及试剂
仪器:蠕动泵
试剂:供试液(SD浓度:20ug/ml、酚红浓度:20ug/ml)、酚红液(酚红浓度:20ug/ml)、20%乌拉坦、生理盐水、%NaNO2溶液、1mol/L盐酸、 NaOH、%氨基磺酸铵(NH2SO3NH4 )溶液、%萘
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乙二胺溶液
四、实验步骤
1、循环试验的操作
(1)恒温水浴调节:将水浴温度调节为37±℃。
(2)供试液的准备:量取75-80ml供试液加入循环装置的烧瓶中,置恒温水浴中预热至37±℃。
(3)生理盐水的准备:取生理盐水适量,预热至37℃备用。
(4)蠕动泵流速的调节:调节流速为5ml/。
(5)大鼠麻醉:取大鼠一只称重,(浓度为20%)麻醉,并固定于固定台上。
(6)小肠两端插管;沿大鼠腹部中线打开腹腔(约3cm),在12指肠上部和回肠下部各切一小口,,并用线扎紧。
(7)肠管洗涤:用注射器将37℃的生理盐水缓缓注入肠管,洗去肠管内容物至净。
(8)作成回路:将肠管两端的玻璃管按图所示与胶管连接,作成回路,开动蠕动泵,其流速为5ml/min。
(9)取样:以5ml/min流速循环10min后,,立即自供试液烧瓶中取样两份(),分别作为SD和酚红零时间样品,另向烧瓶中补加酚红液2ml,其后每隔15min亦按同法取样及补加酚红液,共取样9次,停止循环。
2、SD的测定
取样品1ml置10ml带塞试管中à加入1mol/LHCl 5ml,摇匀,à% NaNO2 1ml,摇匀,放置3minà% NH2SO3NH4 1ml,摇匀,放置3minà%萘乙二胺2ml,摇匀,放置20min。在550nm的波长处测定吸收度。
比色空白液:取酚红液1ml代替样品,其余操作与样品处理一致。
3、酚红的测定
, NaOH 5ml,摇匀,在555nm的波长处测定吸收度。
比色空白液:
五、实验数据记录和处理
1、标曲回归方程:
SD :y=-(R2=)
酚红:y=+(R2=)
2、SD和酚红样品浓度计算
计算结果如下表:
表 1 大鼠